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三羥(Tris)作為一種常用的生物緩沖劑,因它的結(jié)構(gòu)簡(jiǎn)單,反而有活性,易于參與反應(yīng),所以我們可以通過(guò)它的分子結(jié)構(gòu)制備出與它相關(guān)的產(chǎn)品。如Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS等均為生物化學(xué)實(shí)驗(yàn)和分子生物學(xué)實(shí)驗(yàn)中經(jīng)常使用的緩沖劑,它們的分子結(jié)構(gòu)中都含有Tris的分子結(jié)構(gòu)。它也常被用作RNA雜交和DNA裂解的緩沖液。在Tris的使用中,需要注意:Tris緩沖液的pH值受溫度和濃度影響很大,因此在配制過(guò)程中要考慮使用環(huán)境。且來(lái)看看它在Bis-Tris, Tricine,TES,TAPS中如何發(fā)揮它的潛能的。
三羥,英文名Tromethamine或Trometamol,簡(jiǎn)稱THAM,它是一種應(yīng)用非常廣泛的有機(jī)試劑,可用于制作、有機(jī)合成、生物緩沖劑等。其中在生化實(shí)驗(yàn)中,許多蛋白質(zhì)及核酸相關(guān)的實(shí)驗(yàn)都需要用THAM作為生物緩沖劑。THAM可由與或在催化劑下高壓反應(yīng),然后經(jīng)氮?dú)?、氫氣轉(zhuǎn)換制得。THAM極易溶于水,本身顯堿性,作為緩沖劑時(shí)通常需要配合酸一起使用,比如THAM-HCl緩沖液就是比較常用的,除此之外還有許多其他的緩沖液體系。
Tris通常被用于核酸DNA或RNA的瓊脂糖凝膠電泳中的緩沖液,通常用的緩沖體系有TAE、TBE、TPE等,即生物緩沖劑Tris配合EDTA以及醋酸、硼酸、磷酸等配制成的緩沖溶液。不同公司使用的緩沖液有所差異,相對(duì)來(lái)說(shuō)使用磷酸的TPE較少,主要是使用TAE和TBE緩沖液。在做核酸瓊脂糖凝膠電泳時(shí),首先的準(zhǔn)備工作就是制備凝膠,瓊脂糖凝膠做的好壞直接影響電泳效果和效率。這個(gè)制作過(guò)程耗時(shí)較長(zhǎng),節(jié)約時(shí)間考慮也可以直接購(gòu)買制備好的預(yù)制凝膠。
提到緩沖液就不得不延伸一下,這就是Henderson-Hasselbalch方程。
在前面提到,
將等式同時(shí)取對(duì)數(shù),并簡(jiǎn)化就可以得到:
或者
這就是Henderson-Hasselbalch方程。
注意:式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時(shí)的濃度,除了酸性過(guò)于強(qiáng)的情況下,由于同離子效應(yīng)的存在,一般都可用此式計(jì)算。