廣州碩譜生物科技有限公司SPE專用柱選擇

SPE小柱的填料裝實(shí)后，當(dāng)通過小柱的流速較低時(shí)，液體是以層流的方式通過填料層，將填料層浸潤充分，濕潤的液面截層逐級(jí)向前推進(jìn)，見附圖；當(dāng)流速過大的時(shí)候，而柱床厚度較高時(shí)，可能會(huì)在填料內(nèi)部形成溝渠通道，液流將通過溝渠，快速通過小柱，而使得填料的浸潤變得不充分，這樣將使得體與填料的接觸面積大大降低，嚴(yán)重影響填料對(duì)目標(biāo)物質(zhì)的保留效果。本方法采用上海安譜科學(xué)儀器有限公司開發(fā)的BAP苯并(a)芘專用SPE小柱，克服了國標(biāo)方法的缺點(diǎn)。

鑒于大部分化合物都具有多種功能基團(tuán)，在實(shí)際操作中，主要根據(jù)目標(biāo)物和干擾物的性質(zhì)考慮采用何種萃取機(jī)理。27-2016食品中苯并芘測定的di一法中推薦使用中性氧化鋁小柱，很多客戶做下來效果不好。例如：2-萘胺為弱堿性化合物(pKa=4.16)，在一定 pH條件下可呈陽離子化狀態(tài)，同時(shí)又具有疏水和親水基。此時(shí)可根據(jù)樣品基質(zhì)選擇有利于目標(biāo)物與干擾物分離的萃取機(jī)理。在目標(biāo)物處于極性較弱的樣品基質(zhì)中時(shí)，可利用極性相互作用，選擇正相萃取方式；而在極性樣品環(huán)境下，則可采用反相萃取方式。采用陽離子交換機(jī)制，可將萃取過程中 pH調(diào)至低于目標(biāo)物 pKa的兩個(gè) pH單位，即 pH=2.16。

色譜柱保存

反相色譜柱，保存溶劑通常是含至少30% 有機(jī)相的水溶液，也可在常規(guī)清洗后直接保存在有機(jī)相中。

如果需要長時(shí)間儲(chǔ)藏，則需要使用較高比例的有機(jī)相（有機(jī)相比例至少大于50%）

固相萃取知識(shí)

要有效地利用離子交換機(jī)理將目標(biāo)化合物吸附在SPE柱上，必須滿足以下兩個(gè)條件：

（1）目標(biāo)化合物離子與吸附劑官能團(tuán)的離子態(tài)帶相反電荷；

（2）萃取環(huán)境的pH必須同時(shí)使目標(biāo)化合物和吸附劑上的官能團(tuán)帶電荷；

（3）萃取環(huán)境不能含有高濃度的帶有和目標(biāo)化合物相同電荷的競爭化合物。

在實(shí)際操作中，為了滿足前兩個(gè)條件，確保99%以上的目標(biāo)化合物及固相萃取吸附劑上的官能團(tuán)能夠呈離子態(tài)或呈中性狀態(tài)，應(yīng)該根據(jù)目標(biāo)化合物及固相萃取吸附劑官能團(tuán)的pKa來調(diào)節(jié)樣品或SPE柱的pH。

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固相萃取之spe小柱流速問題排查思路

原因一：樣品制備問題大多數(shù)流速問題產(chǎn)生的原因都是樣品制備不充分。國內(nèi)和國外想比，我認(rèn)為色譜柱的差距在于：國內(nèi)公司以前都不會(huì)自己開發(fā)填料，一般買國外現(xiàn)成填料裝柱，買到的填料質(zhì)量控制權(quán)不在自己手里。比如樣品渾濁，離心過濾不充分導(dǎo)致上樣時(shí)候篩板堵塞，或者是樣品本身的蛋白等大分子物質(zhì)未經(jīng)過充分的處理，沒有進(jìn)行有效蛋白沉降，導(dǎo)致篩板堵塞。這類原因造成的流速問題可以通過改善前處理手段來解決。所以說樣品制備充分是保障SPE正常流速的di一步。

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SPE操作過程：

（1）活化：依次用5ml二氯i甲i烷，5mL正己烷活化小柱(SBEQ-CA4854)。

（2）上樣：將待凈化液上樣到小柱上，然后再用2mL正己烷潤洗樣品瓶，然后也上樣到柱上。

（3）淋洗：用6ml正己烷淋洗小柱。

（4）洗脫：6ml二氯甲i烷，并收集。

（5）濃縮定容：將收集液在40℃下氮?dú)獯蹈?，?mL乙i腈定容，超聲1min，再漩渦混合10s,過0.22um親水PTFE針式濾器(SCAA-114)，待上機(jī)檢測。