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除氣采用流動相脫氣，可避免 HPLC系統(tǒng)的故障，從而順利地獲得理想的數(shù)據(jù)。HPLC系統(tǒng)中不希望有氣泡存在。HPLC泵在輸送液體時會產(chǎn)生很大的作用力，因為氣體的壓縮比比液體大得多，所以有氣泡出現(xiàn)時，你會看到瞬時流速降低，系統(tǒng)壓力降低。若此氣泡足夠大，液相泵將無法輸送任何溶劑，并且當(dāng)壓力降到預(yù)定的壓力下限以下時，泵將停止工作。一些泵的設(shè)計很好的排除了氣泡，而有些泵的設(shè)計在有氣泡的情況下會停止工作。

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在輸液泵中，由于系統(tǒng)壓力較大，氣泡通常會在流動相溶液中溶解，并與液柱相通。但當(dāng)進(jìn)入檢測器流通池后，系統(tǒng)壓力又恢復(fù)到氣壓，因此氣泡可能再次出現(xiàn)在檢測器流通池中，在色譜柱上會出現(xiàn)不規(guī)律的毛刺。在 UV/VIS/UV/VIS)探測器的液相色譜圖中，噪音毛刺通常是氣泡進(jìn)入和通過循環(huán)池的信號。另外，電化學(xué)(EC)檢測儀對流動相中的溶解氧的存在十分敏感，它是由被測物質(zhì)在電極表面發(fā)生氧化還原反應(yīng)引起電流變化的。另外，泡泡的存在有時會造成保留時間不重復(fù)。因此，必須注意消除流動相中的空氣，同時也要防止管道內(nèi)的空氣(例如 PTFE管)向流動相滲透。

泵下一步要沖洗的是泵。在一次分析之后，不要在幾分鐘內(nèi)停泵，尤其是在流動相中含有難揮發(fā)的緩沖液(例如磷酸鹽)。若不能連續(xù)使用，則在流動相蒸發(fā)時，難揮發(fā)物會粘附在活塞密封墊面上，產(chǎn)生難揮發(fā)物沉淀。它是造成泵密封墊磨損和單向閥泄漏的主要原因之一。因此，不論使用時間長短，在停泵之前都必須用無緩沖液流動相沖洗泵在半個小時以上，如果流動相中有難揮發(fā)的鹽類，那么建議沖洗時間要長一些。

自動進(jìn)樣器自動化進(jìn)樣器還應(yīng)按規(guī)定進(jìn)行清洗。目前設(shè)備多配備有自動進(jìn)樣器的洗液瓶，通常只要注意及時更換，補(bǔ)充沖洗液。還應(yīng)按照自動化進(jìn)樣器中所用的洗滌液的流動處理，并根據(jù)溶劑的有效期和規(guī)定，清洗儲液瓶或更換洗滌液。目前自動取樣器的安裝、操作都很簡單，如果時間允許(尤其是在夜間運(yùn)行)，每次分析后設(shè)純?nèi)軇?、2針(如、)，也是一種好的做法。4、色譜柱在使用過程中，對柱子的污染增大。一般表現(xiàn)是：基線運(yùn)行時，在已記錄的色譜中基線噪聲增加，泵壓力也增大。處理這一問題有效的方法是在每一批樣品分析完畢或準(zhǔn)備卸下柱子時，清洗柱子(例如，、和水)。采用梯度沖洗效果較好，具體比例取決于柱體的使用說明及性能。

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起因：①在線過濾堵塞②泵頭下訂單向閥堵住③檢測池很臟，也有可能是光路有些堵，再不行可能是燈壽命到了④抹布臟了，需要更換。對策：①在線濾網(wǎng)卸下，置燒杯，加純化水煮沸5-10分鐘后，超一下一般就可以了，如果還堵的話就拿稀泡，還不行，就換新的，這是個消耗品②將泵頭下端向閥卸下，兩個都可能堵死，剛卸下來時豎在耳邊搖晃就聽不到聲音了。只需簡單地拿起洗耳球?qū)蜗蜷y吹一下(方向)，吹了沒反應(yīng)可以拿溶劑超聲，但不可用水煮，一般超至在耳邊搖動聲音就不會影響到。③先用溶劑將檢測池沖洗一下，具體的試樣用什么試樣；若不沖洗，將檢測池卸下，看燈能量，若能量還可以(有個幾千)，可能得清洗光路。首先還是請工程師來清洗，因為要清理的零件在探測器下面有一個黑色的碎片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩。

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④拿出5個樣品盤，可以看到里面有一個黑色凸起(看不清是用電筒)，平時進(jìn)樣針就是從那個地方吸的。伸手就能卸下來，里面有一個小白圈(用多了自然就黑了)，換一個新的就好了，一般只有10個才能買儀器。在使用過程中，液相色譜有四個主要要素需要注意：1.液相色譜儀本身：通常儀器本身是沒有問題的，尤其是新買回來的儀器。就儀器本身而言，的是儀器的檢驗，新買回來的儀器一般都是由賣方先對儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作(包括 IQ、 PQ、 OQ)，確認(rèn)順利通過后，再請國家或省級儀器檢定局的來校驗，檢定合格后再用，檢定合格后再用，除此之外，還可以放心使用，此外，還可為儀器的正常使用提供保障。

一些柱效值的測量與計算方法由于色譜峰是假設(shè)在運(yùn)動相中、固定相中樣品濃度為正態(tài)分布而獲得的樣品譜帶分布，所以常將色譜峰型看作正態(tài)曲線來計算理論塔板數(shù)。所以柱效(以理論塔板數(shù)量 n為單位)的公式習(xí)慣上定義為：在式中 tR為色譜峰的保留時間；σ2表示測定色譜峰與時間的偏差； a是與峰高(從測峰寬的基線量起)有關(guān)的常數(shù)，而ω b是用時間表示由色譜峰頂點(diǎn)與色譜峰的基線相交點(diǎn)的切線相交的距離。

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假設(shè)某一色譜峰為正態(tài)峰型，則每一種方法均能得到相同的結(jié)果。即便是獲得較為理想的峰型及溶質(zhì)，由于柱內(nèi)有溝槽或空隙，也會產(chǎn)生非正態(tài)峰型。因此不同的計算方法所得到的 n值相差較大。對于正常模式的偏離，通常用“前延”或“后延”表示。對這些峰型，測峰高度越高，計算出的理論塔板數(shù)值越大(精度越低)。很多情況下，色譜分析人員需要能夠反映整個峰型(包括拖尾)的柱效值，同時為了保證定量的重復(fù)性，還需要有很好的色譜峰對稱。此時色譜峰不對稱的計算方法是合適的。僅為了監(jiān)測色譜柱從次使用到壽命結(jié)束過程中的柱效，那么上述任何一種都可以，應(yīng)選擇簡單的方法。