聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（PCR）是一種用于放大擴(kuò)增特定的DNA部分片段的分子生物學(xué)技術(shù)，它可看作是生物體外的特殊DNA copy，PCR的zui大特點(diǎn)是能將微量的DNA大幅增加。因此，無論是化石中的古生物、歷史人物的殘骸，還是幾十年前兇1殺案中兇1手所遺留的毛發(fā)、皮膚或血液，只要能分離出一丁點(diǎn)的DNA，就能用PCR加以放大，進(jìn)行比對。這也是“微量證據(jù)”的威力之所在。由1983年美國Mullis首先提出設(shè)想，1985年由其發(fā)明了聚合酶鏈反應(yīng)，即簡易DNA擴(kuò)增法，意味著PCR技術(shù)的真正誕生。到如今2013年，PCR已發(fā)展到第三代技術(shù)。1976年，中國科學(xué)家錢嘉韻，發(fā)現(xiàn)了穩(wěn)定的Taq DNA聚合酶，為PCR技術(shù)發(fā)展也做出了基礎(chǔ)性貢獻(xiàn)。

LA PCR的原理

LA PCR的關(guān)鍵是具有3′→5′Exonuclease活性 (Proof reading活性) 的耐熱性DNA聚合酶。在PCR過程中當(dāng)有錯(cuò)誤的堿基攝入時(shí)，反應(yīng)性能將大幅度下降，TaKaRa Ex Taq 和TaKaRa LA Taq 依靠3′→5′Exonuclease活性可將錯(cuò)配的堿基除去，從而延伸反應(yīng)能順利地進(jìn)行下去，使長鏈DNA的擴(kuò)增成為可能。

污染的監(jiān)測

一個(gè)好的實(shí)驗(yàn)室，要時(shí)刻注意污染的監(jiān)測，考慮有無污染是什么原因造成的污染，以便采取措施，防止和消除污染。

1、陽性對照：在建立PCR反應(yīng)實(shí)驗(yàn)室及一般的檢驗(yàn)單位都應(yīng)設(shè)有PCR陽性對照，它是PCR反應(yīng)是否成功、產(chǎn)物條帶位置及大小是否合乎理論要求的一個(gè)重要的參考標(biāo)志。陽性對照要選擇擴(kuò)增度中等、重復(fù)性好，經(jīng)各種鑒定是該產(chǎn)物的標(biāo)本，如以重組質(zhì)粒為陽性對照，其含量宜低不宜高（100個(gè)拷貝以下）。但陽性對照尤其是重組質(zhì)粒及高濃度陽性標(biāo)本，其對檢測或擴(kuò)增樣品污染的可能性很大。因而當(dāng)某一PCR試劑經(jīng)自己使用穩(wěn)定，檢驗(yàn)人員心中有數(shù)時(shí)，在以后的實(shí)驗(yàn)中可免設(shè)陽性對照。

2、陰性對照：每次PCR實(shí)驗(yàn)務(wù)必做陰性對照。它包括：

  （1）標(biāo)本對照：被檢的標(biāo)本是血1清就用鑒定后的正常血1清作對照；被檢的標(biāo)本是組織細(xì)胞就用相應(yīng)的組織細(xì)胞作對照。

  （2）試劑對照：在PCR試劑中不加模板DNA或RNA,進(jìn)行PCR擴(kuò)增，以監(jiān)測試劑是否污染。

3、重復(fù)性試驗(yàn)。

4、選擇不同區(qū)域的引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增。

突變：PCR克1隆的一大優(yōu)點(diǎn)是能夠通過克1隆將所需突變引入目的基因中，以便進(jìn)行突變研究。在 定1點(diǎn)突變中，經(jīng)過設(shè)計(jì)的PCR引物可將堿基置換、刪除或插入整合到特定序列中。引物定位到已克1隆至質(zhì)粒中的序列上。隨后，含有引入突變的PCR產(chǎn)物通過自我連接，重新生成環(huán)狀質(zhì)粒，并用于轉(zhuǎn)化感受態(tài)細(xì)胞。

測序：PCR是為測序富集模板DNA的一種相對簡單的方法。為保證DNA序列準(zhǔn)確性，強(qiáng)烈建議使用高保真PCR來制備測序模板。在 Sanger測序中，PCR擴(kuò)增片段經(jīng)純化并用于測序反應(yīng)。使用常用的測序引物結(jié)合位點(diǎn)對PCR引物的 5′末端進(jìn)行標(biāo)記，以簡化測序工作流程。

         二代測序 （NGS）中，PCR被廣泛用于構(gòu)建DNA測序文庫。在NGS文庫制備中，DNA樣品通過PCR反應(yīng)富集（在起始量有限的情況下）并使用adaptor（以及用于多重檢測的index）標(biāo)記。除了具有高保真度，DNA聚合酶還應(yīng)具有zui小的擴(kuò)增偏好性，從而使測序文庫具有高覆蓋度。