微生物計數(shù)

1.血細胞計數(shù)法

將稀釋的菌液樣品滴在血細胞計數(shù)板上，在顯微鏡下計算4~5個中格的細菌數(shù)，并求出每個小格所含細菌的平均數(shù)，再以此為依據(jù)，估算總菌數(shù)。

①此法的缺點是不能區(qū)分死菌和活菌。

②對壓在小方格界線上的細菌，應(yīng)當取平均值計數(shù)。

③此法可用于測定培養(yǎng)液中酵母jun種群數(shù)量的變化

2.稀釋涂布平板法

原理:每個活細菌在適宜的培養(yǎng)基和良好的生長條件下可以通過生長形成菌落。培養(yǎng)基表面生長的一個菌落，來源于樣品稀釋液中的一個活菌。

①這一方法常用來統(tǒng)計樣品中活菌的數(shù)目

②統(tǒng)計的菌落數(shù)往往比活菌的實際數(shù)目低，原因是當兩個活多個細胞連在一起時，平板上觀察到的只是一個菌落。因此統(tǒng)計結(jié)果一般用菌落數(shù)而不是用活菌數(shù)來表示。

③土壤、水、牛奶、食品和其他材料中所含細菌、酵母、芽孢與孢子等的數(shù)量均可用此法測定。但不適于測定樣品中絲狀體微生物，例如放線jun或絲狀真菌或絲狀藍細菌等的營養(yǎng)體等。

④此法若不培養(yǎng)成菌落，可通過將一定量的菌液均勻地涂布在玻片上的一定面積上，經(jīng)固定染色后在顯微鏡下計數(shù)，這樣又稱涂片計數(shù)法。染色可用臺盼藍，臺盼藍能使死細胞染成藍色，可分別計數(shù)死細胞和huo細胞。

微生物限度檢查

計數(shù)方法適用性試驗

   1.供試液制備

   根據(jù)供試品的理化特性與生物學特性，采取適宜的方法制備供試液。供試液制備若需加溫時，應(yīng)均勻加熱，且溫度不應(yīng)超過45℃。供試液從制備至加入檢驗用培養(yǎng)基，不得超過1 小時。

   常用的供試液制備方法如下。如果下列供試液制備方法經(jīng)確認均不適用，應(yīng)建立其他適宜的方法。

   （1）水溶性供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基溶解或稀釋制成1：10供試液。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋。水溶性液體制劑也可用混合的供試品原液作為供試液。因此，微生物培養(yǎng)特性的觀察也是微生物檢驗鑒別中的一項重要內(nèi)容。

   （2）水不溶性非油脂類供試品 取供試品，用pH7.0無菌氯化鈉-蛋白胨緩沖液，或pH7.2磷酸鹽緩沖液，或胰酪大豆胨液體培養(yǎng)基制備成1：10供試液。分散力較差的供試品，可在稀釋液中加入表面活性劑如0.1%的聚山梨酯80，使供試品分散均勻。若需要，調(diào)節(jié)供試液pH值至6～8。必要時，用同一稀釋液將供試液進一步10倍系列稀釋?！竽cgan菌簡介——大腸埃希氏菌(Escherichiacoli)通常被稱為大腸gan菌，是Escherich在1885年發(fā)現(xiàn)的，在相當長的一段時間內(nèi)，一直被當作正常腸道菌群的組成部分，認為是非致病菌。

   （3）油脂類供試品 取供試品，加入無菌十四烷酸異丙酯使溶解，或與zui少量并能使供試品乳化的無菌聚山梨酯80或其他無抑菌性的無菌表面活性劑充分混勻。表面活性劑的溫度一般不超過40℃（特殊情況下，zui多不超過45℃），小心混合，若需要可在水浴中進行，然后加入預(yù)熱的稀釋液使成1：10供試液，保溫，混合，并在zui短時間內(nèi)形成乳狀液。必要時，用稀釋液或含上述表面活性劑的稀釋液進一步10倍系列稀釋。食源病原微生物可通過接觸物表面、水、土壤、空氣、排泄物、食物等媒介傳播，從而污染“從農(nóng)田到餐桌”的食物鏈任何環(huán)節(jié)。

2.薄膜過濾法

   除另有規(guī)定外，按計數(shù)方法適用性試驗確認的方法進行供試液制備。取相當于1g、1ml或10c㎡供試品的供試液，若供試品所含的菌數(shù)較多時，可取適宜稀釋級的供試液，照方法適用性試驗確認的方法加至適量稀釋液中，立即過濾，沖洗，沖洗后取出濾膜，菌面朝上貼于胰酪大豆胨瓊脂培養(yǎng)基或沙氏葡萄糖瓊脂培養(yǎng)基上培養(yǎng)。30-2010食品安全標準食品微生物學檢驗單核細胞增生李斯特氏菌檢驗GB4789。

   培養(yǎng)和計數(shù) 培養(yǎng)條件和計數(shù)方法同平皿法，每張濾膜上的菌落數(shù)應(yīng)不超100cfu。

   菌數(shù)報告規(guī)則 以相當于1g、1ml或10c㎡供試品的菌落數(shù)報告菌數(shù)；若濾膜上無菌落生長，以<1報告菌數(shù)（每張濾膜過濾1g、1ml或10c㎡供試品），或<1乘以zui低稀釋倍數(shù)的值報告菌數(shù)。