TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl，NaCl，tween20這三種物質(zhì)，是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì)，并且維持一個接近的天然環(huán)境。其中，Tween是一種離子表面活性劑，可加速非特異性結(jié)合的分離。因為Western Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合，孵育過程中，能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高，在孵育后，混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的洗掉，增加特異性。

   蛋白制備及純化過程中緩沖液的選擇非常重要，合適緩沖液才能保證蛋白的活性和結(jié)構(gòu)穩(wěn)定。

      當我們純化蛋白時，的就是要保持蛋白在純化過程中不能失活，或者是盡量降低純化過程對蛋白活性帶來的損失。這就意味著蛋白在整個純化過程中要始終保持可溶性和活性。

       因此設(shè)計一個防止蛋解和聚合的蛋白純化緩沖體系就非常重要了，尤其會凸顯在實驗結(jié)果上。在設(shè)計緩沖buffer時應(yīng)考慮以下幾個因素：pH值、緩沖體系、鹽離子、還原劑和穩(wěn)定劑。其中每一個因素都要根據(jù)你的目的蛋白進行優(yōu)化，并以目的蛋白的活性作為優(yōu)化的評估標準。

使用時確保柱材料能夠與這些還原劑相容。例如，高濃度的還原劑會脫掉鎳柱中的鎳，并使柱子顏色變深呈棕色（這個時候就可以考慮武漢匯研生物科技股份有限公司（www.huiyan-bio.com）的高耐受鎳柱 匯研生物 Ni Focurose 6FF(TED)，匯研TED鎳填料可以耐受10mM的還原劑和100mM的EDTA）聯(lián)系W/Q:514099167，雖然柱子很容易進行再生，但你的蛋白掛載量將會受到很大影響。許多柱材料都會列出其所能夠承受還原劑的濃度，但是我覺得或多或少都會產(chǎn)生影響，并不在于是否達到濃度值。