等溫核酸試劑盒

據(jù)介紹，RPA檢測(cè)的靈敏度很高，能夠?qū)⒑哿康暮怂?尤其是DNA)模板擴(kuò)增到可以檢出的水平，從單個(gè)模板分子得到大約1012擴(kuò)增產(chǎn)物。而且RPA還用不著復(fù)雜的樣品處理，適用于無(wú)法提取核酸的實(shí)地檢測(cè)。RPA不僅可以對(duì)擴(kuò)增產(chǎn)物進(jìn)行終點(diǎn)檢測(cè)，還可以對(duì)擴(kuò)增過(guò)程進(jìn)行實(shí)時(shí)監(jiān)控，甚至可以通過(guò)試紙條(側(cè)流層析試紙條LFD)讀取結(jié)果。

目前，TwistAmp? 試劑盒的擴(kuò)增子長(zhǎng)度在500bp以內(nèi)。不過(guò)，經(jīng)過(guò)特別優(yōu)化的RPA擴(kuò)增，也可以生成更長(zhǎng)的擴(kuò)增產(chǎn)物，或者減慢擴(kuò)增速度(便于定量)，甚至在更低的溫度下進(jìn)行反應(yīng)。

什么是RPA?

概念:

重組酶聚合酶擴(kuò)增（Recombinase Polymerase Amplification，RPA），被稱為是可以替代PCR的核酸檢測(cè)技術(shù)。RPA技術(shù)主要依賴于三種酶:能結(jié)合單鏈核酸（寡核苷酸引物）的重組酶、單鏈DNA結(jié)合蛋白（SSB）和鏈置換DNA聚合酶。這三種酶的混合物在常溫下也有活性，適宜反應(yīng)溫度在37°C左右。

“一般來(lái)說(shuō)，核酸檢測(cè)是目前準(zhǔn)確的診斷方法?！庇腥烁嬖V記者，核酸檢測(cè)試劑盒出現(xiàn)假陰性，即沒(méi)有發(fā)現(xiàn)隱藏的病毒，可能與兩個(gè)方面有關(guān)。一是樣品沒(méi)有采集到。這一點(diǎn)很容易理解。例如，咽拭子采樣時(shí)人比較難受，深度不夠可能會(huì)采集不到含有病毒的樣本。但這樣的情況應(yīng)該很少發(fā)生。

另一個(gè)假陰性的原因是核酸檢測(cè)試劑盒的探針和引物質(zhì)量有波動(dòng)，特別是定量的不造成檢測(cè)的不準(zhǔn)確。換句話說(shuō)，由于這一次各家核酸檢測(cè)試劑盒供應(yīng)商都是臨時(shí)啟動(dòng)，有些準(zhǔn)備不足，或是執(zhí)行規(guī)定步驟不到位，導(dǎo)致在生產(chǎn)過(guò)程中不進(jìn)行定位，或是酶活性不足，或是酶中含有抑制酶鏈反應(yīng)的重金屬離子等，都可能造成檢測(cè)結(jié)果出現(xiàn)假陰性。

由新型冠狀病毒（SARS-CoV-2）引起的新冠（COVID-19）正在世界范圍內(nèi)大規(guī)模蔓延，威脅著的公共衛(wèi)生系統(tǒng)和人類的生命健康。目前，由于缺乏有效的措施，因此盡可能多的篩選有癥狀或無(wú)癥狀者并找到他們的接觸范圍是預(yù)防新冠疫情傳播的有效方式。逆轉(zhuǎn)錄-實(shí)時(shí)定量聚合酶鏈?zhǔn)椒磻?yīng)（RT-qPCR），因其高的靈敏度和特異性，是目前新冠檢測(cè)的金標(biāo)準(zhǔn)方法。但是該方法對(duì)實(shí)驗(yàn)室環(huán)境、檢測(cè)儀器、以及操作人員要求相對(duì)較高，因此不利于推廣到需要現(xiàn)場(chǎng)即時(shí)檢測(cè)（POCT）的地方，尤其是在欠發(fā)達(dá)國(guó)家或資源匱乏的地區(qū)。