低溫生物菌種——菌種分離方法介紹

孢子分離又可分為以下幾種方法：

( 1 ）褶上涂抹法：選取新鮮、健壯、未開傘、未裂破的子實體，洗凈后用75 %酒精表面滅菌2 分鐘，然后連同培養(yǎng)基一起放入接種箱內(nèi)，經(jīng)熏蒸消毒12 ～ 24 小時，再按無菌操作技術(shù)將接種環(huán)在子實體菌褶上涂抹，把涂抹后帶孢子的接種環(huán)在培養(yǎng)基上劃線接種，，后置于25 ～ 28 ℃恒溫箱內(nèi)培養(yǎng)，可得純菌種。

( 2 ）孢子印采集法：取滅過菌的載玻片、試紙或黑布，置于新鮮、未開傘或未開裂的子體菌褶的下方。經(jīng)24 小時后，便落下孢子，形成印痕（即孢子?。?。然后，用接種環(huán)或玻璃棒蘸取孢子，接種在平面或斜面培養(yǎng)基上，進行恒溫培養(yǎng)，可得純菌種。

( 3 ）孢子收集器采集法：孢子收集器由玻璃鐘罩、培養(yǎng)皿、三角架、搪瓷盤等組成。鐘罩下為一搪瓷盤，直徑25 厘米左右，盤內(nèi)先墊襯4～6 層紗布，中央放1 副9 厘米直徑的培養(yǎng)皿，大蓋口朝下，上放小的，口向上。然后，在上面小的培養(yǎng)皿上放1 只鉛絲繞成的三角架，再將帶孔的玻璃鐘罩蓋上，頂上罩孔用棉塞塞好，用紗布包好整個孢子收集器，置于高壓滅菌鍋或蒸籠內(nèi)滅菌2小時。

孢子收集器滅菌消毒后，放入無菌室或無菌箱內(nèi)。然后，用小刀割取1 塊4～5 厘米大小的子實體，插在收集器內(nèi)的三角架頂上（若無孢子收集器，也可用培養(yǎng)皿代替）。再置于溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)24 小時，培養(yǎng)皿中便可見到白色粉狀物，此即為孢子。此時，可將孢子收集器再移至接種箱內(nèi)，取出培養(yǎng)皿，蓋好，并在培養(yǎng)皿內(nèi)加入10 ～ 20 毫升的無菌水，使孢子散于本中，成為孢子懸浮液。然后，再用無菌打針筒或吸管吸取孢子懸浮液，接種于試管斜面培養(yǎng)基上，每管注2 ～ 3 滴。置于24 ～ 26 ℃溫度下培養(yǎng)5 ～ 7 天，培養(yǎng)基上便可長出白色菌落。待菌落直徑有0 . 5 厘米時，選健壯的菌落，再移接于另一試管的斜面培養(yǎng)基上培養(yǎng)。當白色菌絲長滿試管時，便得純菌種。

低溫生物知多少？

實驗室的傳代保藏過程

1. 按說明書要求復溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當溫度下培養(yǎng)適當時間，分離出單個純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面作為工作用。此時，保藏為第2代，但工作用則為第三代。

3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當溫度下培養(yǎng)適當時間后可用于試驗。

4. 取一支冷凍保存的G2代轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當溫度下培養(yǎng)適當時間后用作工作用（W3）。

5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長、轉(zhuǎn)種后的G2經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當工作用代數(shù)小于5時，可直接用上一代工作用轉(zhuǎn)接下一代工作用，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。

實驗證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細菌則需應用其它方法。

微生物菌種有什么功效呢？

微生物肥料的功效是一種綜合性作用，一般不直接為農(nóng)作物提供營養(yǎng)元素，主要起間接營養(yǎng)的作用，歸納起來主要有如下幾方面。

改良土壤結(jié)構(gòu)

微生物還能分泌產(chǎn)生大量的胞外多糖類物質(zhì)，如莢膜多糖、肽聚糖等。研究表明，這些有益微生物產(chǎn)生的糖類物質(zhì)，占土壤有機質(zhì)的0.1%，它們能與植物根系分泌物、土壤膠體等共同作用,形成土壤團粒結(jié)構(gòu)。此外，它們還參與腐殖質(zhì)形成，改善土壤理化性質(zhì)。

改善作物品質(zhì)

許多微生物肥料能改善作物品質(zhì)。根瘤菌固定的氮素能輸往籽粒，使得豆科作物籽粒蛋白質(zhì)含量提高。此外，一些蔬菜施用某些微生物肥料之后，能增加其中的維生素含量，降低葉菜類作物中的含量，提高果菜類作物中的糖分含量等。

低溫生物菌種的發(fā)展趨勢

生產(chǎn)成本低、應用效果好

我國長期大量施用化肥，使單位化肥量的增產(chǎn)量下降，因此有效合理施用化肥，提高化肥利用率已成為一個重要課題。因此，增加有機肥、微生物肥料的施用不再是權(quán)宜之計，而是降低農(nóng)民投入，提高產(chǎn)品品質(zhì)、減少環(huán)境污染，取得較大的經(jīng)濟、社會和生態(tài)效益的一項有效措施。

生產(chǎn)無公害食品、減少環(huán)境污染的需求

無公害食品對當今的農(nóng)業(yè)提出了更高的要求。人們對農(nóng)產(chǎn)品的數(shù)量和質(zhì)量也提出來更高的要求。隨著國內(nèi)外積極發(fā)展綠色農(nóng)業(yè)(生態(tài)農(nóng)業(yè))，生產(chǎn)安全、無公害的食品成為一個發(fā)展趨勢，這就為開發(fā)生產(chǎn)好品質(zhì)的微生物肥料提供一個好的發(fā)展機遇。并且由于濫用化肥引起的土壤質(zhì)量下降，地下水污染等問題日益突出，無污染的微生物肥料的綜合作用更顯示出它的應用優(yōu)勢和良好的發(fā)展前景 。