水中糞大腸菌群的常見(jiàn)檢測(cè)方法

1、聚合酶鏈?zhǔn)郊夹g(shù)

提取糞大腸菌群混懸液和待測(cè)水樣的DNA，利用PCR技術(shù)擴(kuò)增編碼約260bp的LacZ基因（β-半乳糖苷酶基因）和約150BP的UdiA基因（β-D-半乳糖苷酶基因）的DNA，分別檢測(cè)大腸菌群數(shù)和大腸桿菌。

2、熒光原位雜交技術(shù)

由于糞大腸菌群特異的DNA序列，借助熒光標(biāo)記的特異寡聚核苷酸片段作為的探針與待測(cè)水樣中的DNA分子雜交，將雜交細(xì)胞經(jīng)熒光檢測(cè)體系在鏡下對(duì)待測(cè)DNA進(jìn)行定性、定量分析，確定菌群數(shù)。

目前，大腸菌群檢測(cè)方法發(fā)展很快，已提高到分子生物學(xué)水平，使檢測(cè)更快速、準(zhǔn)確。酶底物法以其操作簡(jiǎn)便、檢測(cè)周期短，將取代多管發(fā)酵法、濾膜法等傳統(tǒng)方法，尤其是酶底物法采用密封培養(yǎng)技術(shù)，在檢測(cè)醫(yī)院污水時(shí)可以減少人員接觸而降低檢測(cè)人員的致病風(fēng)險(xiǎn)，因此具有更強(qiáng)的實(shí)用價(jià)值和應(yīng)用價(jià)值，正是目前水中糞大腸菌群的快速檢測(cè)標(biāo)準(zhǔn)方法之一。

酶底物法

方法靈敏度不同，多管發(fā)酵法為每 100 m l樣本中 2 cfu;酶底物法為每 100 m l樣本中1 cfu。

方法步驟不同，多管發(fā)酵法為多步驟測(cè)定，費(fèi)時(shí)費(fèi)力； 酶底物法為一步測(cè)定，省時(shí)省力。

方法耗時(shí)不同，多管發(fā)酵法對(duì)于陰性水樣需 24 h 報(bào)告結(jié)果，對(duì)于陽(yáng)性水樣則需72 h報(bào)告結(jié)果； 酶底物法無(wú)論陰性或陽(yáng)性水樣均可24h報(bào)告結(jié)果。

方法費(fèi)用不同，多管發(fā)酵法可使用半成品培養(yǎng)基或自配培養(yǎng)基，檢測(cè)成本低廉，目前國(guó)內(nèi)也開(kāi)發(fā)有初發(fā)酵試驗(yàn)的成品培養(yǎng)基和一次性耗材，但由于陽(yáng)性水樣必須進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，從而限制了該商品試劑的應(yīng)用推廣；酶底物法使用商品試劑，目前均有國(guó)內(nèi)外生產(chǎn)商供應(yīng)，該方法在東部經(jīng)濟(jì)發(fā)達(dá)地區(qū)使用較廣泛。我們國(guó)內(nèi)也逐步完善替代傳統(tǒng)方法，酶底物法檢測(cè)程控定量封口機(jī)會(huì)越來(lái)越受歡迎，用戶也越來(lái)越多。

食品大腸桿菌菌群檢測(cè)--平板計(jì)數(shù)法

相比于MPN計(jì)數(shù)法，平板計(jì)數(shù)法更適用于大腸菌群含量較高的食品。但大腸菌群多少算是含量較高呢？國(guó)標(biāo)里沒(méi)有明確規(guī)定，但通常認(rèn)為，產(chǎn)品大腸菌群以100CFU/g（mL）為界，超過(guò)這個(gè)含量一般認(rèn)為是含量較高。但具體什么時(shí)候選用平板計(jì)數(shù)法進(jìn)行大腸桿菌菌群的檢測(cè)，大部分情況還是要看你的產(chǎn)品執(zhí)行的標(biāo)準(zhǔn)。假如產(chǎn)品標(biāo)準(zhǔn)要求大腸菌群含量的單位為CFU/g（mL），那必須選用平板計(jì)數(shù)法。若是/g(mL)或者M(jìn)PN/100g(mL)，就應(yīng)選擇MPN計(jì)數(shù)法，MPN法具體選用哪版國(guó)標(biāo)此處不再贅述。因此，根據(jù)自己產(chǎn)品的情況選擇適當(dāng)?shù)臋z測(cè)方法。