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分析試劑盒配液:將30倍濃縮洗滌液用蒸餾水30倍稀釋后備用 洗滌:小心揭掉封板膜,棄去液體,甩干,每孔加滿洗滌液,靜置30秒后棄去,如此重復(fù)5次,拍干。 加酶:每孔加入酶標試劑50μl,空白孔除外。 溫育:操作同3。 洗滌:操作同5。 顯色:每孔先加入顯色劑A50μl,再加入顯色劑B50μl,輕輕震蕩混勻,37℃避光顯色15分鐘. 終止:每孔加終止液50μl,終止反應(yīng)(此時藍色立轉(zhuǎn)黃色)。 測定:以空白空調(diào)零,450nm波長依序測量各孔的吸光度(OD值)。 測定應(yīng)在加終止液后15分鐘以內(nèi)進行。
就是具有自動清洗程序的全自動生化分析儀也有交叉污染,例如Beckman 全自動生化分析儀CX4,它的試劑針(probe)、樣品吸樣針及反應(yīng)攪拌棒是利用高壓沖洗洗液沖洗,然后用高壓壓縮空氣吹干,有時由于洗液壓力和壓縮空氣壓力偏低,使試劑吸針、樣品針及反應(yīng)攪拌棒沖洗不干凈、吹不干,從而導(dǎo)致反應(yīng)池之間相互污染、試劑間交叉污染,是檢驗結(jié)果偏離。另一個值得注意的問題是許多生化儀器由于長期頻繁的利用,使加樣針和試劑針的磨損加重或的“特氟龍”吸頭不及時更換,使吸樣針或試劑針密封層增大,產(chǎn)生泄露現(xiàn)象也是造成樣本間及實際間項目污染的一個重要原因。
在全自動生化分析儀使用中,我們發(fā)現(xiàn)一個項目會影響緊隨其后項目的測試結(jié)果,造成這種影響的原因之一是一種實際中含有另一試驗的測定物質(zhì)而直接干擾其測試結(jié)果。比如:在TP試劑中含有大量的CUSO4,如果將Cu放在TP項目的后面檢測,會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。再如P放在含有磷酸鹽的項目后面,TBA放在含有膽酸鹽的項目后面都會使檢測結(jié)果偏高或重復(fù)性差。
隨著全自動生化分析儀的普及,“開瓶穩(wěn)定性”也隨之受到了大家的重視,但是就目前有的試劑方法學(xué)來講,還達不到人們所要求的試劑開瓶后在儀器內(nèi)放很長時間不需要定標,比如ALP、TP、GSP、等PH為堿性的試劑,開瓶后試劑會吸收空氣中的二氧化碳,使試劑本身的PH值下降,如果長時間開瓶不定標或者校準,會使檢測結(jié)果發(fā)生偏離,在國外有的項目有明文規(guī)定,必須72小時之內(nèi)定標,比如BUN。但是在國內(nèi)的某些實驗室為了方便,很長時間都不作校準,導(dǎo)致測定結(jié)果的不準確,解決辦法:a、了解試劑特性。及時對部份項目進行校準,對于每天標本量不多的醫(yī)院,可按照1-2天的用量取用試劑放入儀器。