蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個(gè)重要步驟

1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純，必須要進(jìn)一步純化。

2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中，從中它能通過(guò)一種鹽或有機(jī)化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液，有時(shí)加，如2--2，4-（MPD）。正常情況下，沉淀劑也被加入，但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對(duì)于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白，還需要加入去污劑。

3. 使溶液過(guò)飽和。在這一步中，小聚集體形成，它是晶體生長(zhǎng)所需的核。對(duì)小分子的結(jié)晶來(lái)說(shuō)，相比于蛋白質(zhì)更為人熟知，晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個(gè)能障被突破了，晶體開(kāi)始生長(zhǎng)。能障在高水平的過(guò)飽和度時(shí)很容易克服。因此，在高過(guò)飽和度時(shí)，晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個(gè)過(guò)飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過(guò)多種方法來(lái)研究，包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。

4. 一旦晶核形成，晶體生長(zhǎng)正式開(kāi)始。對(duì)低分子量的化合物而言，新分子會(huì)逐步結(jié)合到正在生長(zhǎng)的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大，相對(duì)于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成，要么發(fā)生在表面隨機(jī)形成的晶核。

蛋白結(jié)晶板過(guò)程

概括了蛋白質(zhì)結(jié)晶的基本過(guò)程,闡述了蛋白質(zhì)結(jié)晶的早期發(fā)展歷程,重點(diǎn)介紹了蛋白質(zhì)結(jié)晶的近期研究狀況,主要包括:形核機(jī)理的研究,結(jié)晶條件的篩選和結(jié)晶技術(shù)的優(yōu)化以及基于結(jié)構(gòu)的設(shè)計(jì)技術(shù).特別是對(duì)離子液體在蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程中的應(yīng)用及發(fā)展前景進(jìn)行了討論，

論述了國(guó)內(nèi)外生物大分子(蛋白質(zhì),酶等)沉淀結(jié)晶的研究現(xiàn)狀和進(jìn)展,著重從結(jié)晶熱力學(xué),粒子聚集,結(jié)晶的成核與晶體生長(zhǎng),以及場(chǎng)的作用等方面闡述了蛋白質(zhì)沉淀結(jié)晶過(guò)程的特定現(xiàn)象與可能的結(jié)晶機(jī)理,對(duì)蛋白質(zhì)的沉淀結(jié)晶過(guò)程作了的描述,并提出未來(lái)研究方向,為蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)分析,新藥設(shè)計(jì),生化研究以及工業(yè)化生產(chǎn)提供一定的基礎(chǔ)。

蛋白質(zhì)晶體板介紹使用

通過(guò)紅外光譜,掃描電鏡,X射線衍射對(duì)產(chǎn)物的晶型,形貌及物相進(jìn)行了詳細(xì)表征,初步探討了文石晶體形成機(jī)理及生長(zhǎng)機(jī)理。本文研究的主要內(nèi)容及所獲得的結(jié)論如下:1.常溫常壓下,以竹蟶韌帶纖維狀蛋白質(zhì)為基底,采用氣體擴(kuò)散法可以在較大的條件范圍內(nèi)合成出純文石晶體:即稀硫酸濃度0.1mol-L-1,NH4HCO3粉末19.0g,CaCl2濃度0.9-9.0mmol·L-1,溶液高度10-30mm,反應(yīng)溫度20-30℃,結(jié)晶時(shí)間3-12小時(shí)。而空白對(duì)照(以玻璃蓋玻片為基底)制備出的晶體主要為菱形方解石,還有少量文石和球文石。