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ELISA試劑盒的發(fā)展前景
臨床測定技術(shù)的發(fā)展主要在于方法學(xué)的發(fā)展,而方法學(xué)的發(fā)展依托于試劑生產(chǎn)技術(shù)不斷進(jìn)步更新和型標(biāo)記物的應(yīng)用。分子生物學(xué)正在并肯定會(huì)讓對整個(gè)生命科學(xué)有一個(gè)徹底的認(rèn)識,其對測定技術(shù)發(fā)展的影響也是直接而又有效的,對以些難以檢測的生物活性物質(zhì)的測定,并且大大提高了檢測的靈敏度和特異性。
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ELISA試劑盒的應(yīng)用領(lǐng)域
ELISA法是診斷中的一項(xiàng)新技術(shù),現(xiàn)已成功地應(yīng)用于多種病原微生物所引起的病種等方面的診斷。也已應(yīng)用于大分子抗原和小分子抗原的定量測定,根據(jù)已經(jīng)使用的結(jié)果,認(rèn)為ELISA法具有靈敏、特異、簡單、快速、穩(wěn)定及易于自動(dòng)化操作等特點(diǎn)。不僅適用于臨床標(biāo)本的檢查,而且由于一天之內(nèi)可以檢查幾百甚至上千份標(biāo)本,因此,也適合于流行病學(xué)調(diào)查。本法不僅可以用來測定,而且也可用于測定體液中的循環(huán)抗原,所以也是一種早期診斷的良好方法。因此ELISA法在生物醫(yī)學(xué)各領(lǐng)域的應(yīng)用范圍日益擴(kuò)大,可概括四個(gè)方面:
1、酶染色各種細(xì)胞內(nèi)成份的定位。
2、研究抗酶的合成。
3、顯現(xiàn)微量的沉淀反應(yīng)。
4、定量檢測體液中抗原或成份。
Elisa試劑盒的注意事項(xiàng)
Elisa試劑盒是否滅活:加熱可滅清中補(bǔ)體系統(tǒng),在較少數(shù)情況下(培養(yǎng)ES細(xì)胞,平滑肌細(xì)胞時(shí))建議滅活,在培養(yǎng)其余細(xì)胞時(shí)不建議滅清。滅活非常容易產(chǎn)生沉淀,如必須滅活請按56℃,30 min,輕微搖晃原則操作,滅活溫度高、時(shí)間長、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。
Elisa試劑盒培養(yǎng)基:無培養(yǎng)基在結(jié)果重復(fù)性、細(xì)胞體外分化方面有優(yōu)勢,但是,仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物,尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長狀態(tài)不良時(shí),常常會(huì)先使用有的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng),待細(xì)胞生長旺盛后再換成培養(yǎng)液。
Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見問題及解決方案
不正常的標(biāo)準(zhǔn)曲線
1 錯(cuò)誤的方法重懸標(biāo)準(zhǔn)品 加入正確量的溶液重懸標(biāo)準(zhǔn)品,重懸充分
2 標(biāo)準(zhǔn)品稀釋錯(cuò)誤 按照說明書要求稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
3 標(biāo)準(zhǔn)品污染 使用一次性的滅菌吸頭, 標(biāo)準(zhǔn)品貯存于2-8 ℃
4 錯(cuò)誤的倍比稀釋步驟 按照說明書倍比稀釋標(biāo)準(zhǔn)品
5 波長選擇錯(cuò)誤 TMB為底物和以O(shè)PD為底物的試劑盒均有使用,而 前者比色波長為450nm,后者為492nm。雙波長比色分析優(yōu)于單波長。
6 標(biāo)準(zhǔn)品混用 不同批號試劑勿混用
7 試劑盒在運(yùn)輸途中時(shí)間太長,溫度太高,標(biāo)準(zhǔn)品失活 盡量縮短運(yùn)輸時(shí)間,夏季應(yīng)放冰塊降溫
8 ELISA未終止而直接檢測450nm和620nm TMB顯色需終止后檢測,否則會(huì)出現(xiàn)620nm比450nm讀數(shù)高的現(xiàn)象。(數(shù)值仍有梯度規(guī)律)