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博日冷凍食品加工公司熒光定量PCR來電咨詢 廣州勱博公司

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發(fā)布時間:2020-09-13 05:18  






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QF-PCR技術(shù)在國外已有較廣泛的應(yīng)用,但目前尚未在國內(nèi)產(chǎn)前診斷臨床中普遍開展。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會造成核酸的斷裂和損失,因此在疑難檢材的檢驗過程中,存在PCR擴(kuò)增失敗,DNA檢驗不成功的情況。為規(guī)范使用QF-PCR技術(shù),由國家衛(wèi)生和計劃生育委i員會召集、中國醫(yī)學(xué)科學(xué)院北京協(xié)和醫(yī)院產(chǎn)前診斷中心主辦的"全國產(chǎn)前篩查與診斷技術(shù)管理規(guī)范編制研討會"于2015年11月14日在成都召開,會議就QF-PCR等快速產(chǎn)前診斷技術(shù)的臨床應(yīng)用進(jìn)展及其在國內(nèi)應(yīng)用中存在的具體問題進(jìn)行了深入而廣泛的探討,并形成了QF-PCR技術(shù)在產(chǎn)前診斷中的應(yīng)用專家共識。

廣州勱博--生豬屠宰場PCR    

熒光定量PCR早稱TaqMan PCR,后來也叫Real-Time PCR,是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術(shù)。該技術(shù)是在常規(guī)PCR基礎(chǔ)上加入熒光標(biāo)記探針或相應(yīng)的熒光染料來實現(xiàn)其定量功能的。還有的在入舍消毒池中,只是例行把水和火堿放進(jìn)去,也不攪拌,火堿靠自身溶解需要較長時間,那剛放好的消毒水的作用就不確實了。其原理: 隨著PCR反應(yīng)的進(jìn)行,PCR反應(yīng)產(chǎn)物不斷累計,熒光信號強(qiáng)度也等比例增加。每經(jīng)過一個循環(huán),收集一個熒光強(qiáng)度信號,這樣我們就可以通過熒光強(qiáng)度變化監(jiān)測 產(chǎn)物量的變化,從而得到一條熒光擴(kuò)增曲線圖。 


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廣州勱博--食品企業(yè)/公司/廠非洲檢測

目前全世界都沒有有效的非洲i疫i苗進(jìn)行預(yù)防,現(xiàn)在有效的防控方法仍然是對非洲病毒進(jìn)行檢測,根據(jù)檢測結(jié)果,對發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對疫點地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。農(nóng)i業(yè)部要求豬場、飼料廠和屠宰廠和流通環(huán)節(jié)必須進(jìn)行非洲病毒檢測。豬場、飼料廠、屠宰廠和流通環(huán)節(jié)用我們的ASFV LAMP現(xiàn)場可視化快速檢測試劑盒對非洲病毒進(jìn)行現(xiàn)場檢測。研究表明,每個模板的Ct值與該模板的起始拷貝數(shù)的對數(shù)存在線性關(guān)系,起始拷貝數(shù)越多,Ct值越小。根據(jù)檢測結(jié)果,對發(fā)生疫情的地方嚴(yán)防死守,對疫點地區(qū)生豬全部撲殺,進(jìn)行無害化處理,防止疫情的擴(kuò)散。從而對非洲進(jìn)行有效的防控。i大限度減少養(yǎng)殖戶經(jīng)濟(jì)損失。

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PCR檢測同熒光PCR類似,都是使用的引物和探針以VP72編碼區(qū)域作為靶基因設(shè)計,該基因研究清楚,且高度保守,即使在滅活或降解的樣品中也可檢測到已知所有22種p72病毒基因型的多個毒株。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號隨著PCR反應(yīng)的積累來實時監(jiān)控PCR反應(yīng)的進(jìn)程,并通過分析軟件對PCR的反應(yīng)進(jìn)行檢測分析的技術(shù)。PCR檢測雖不需要熒光顯微設(shè)備,但也需要相關(guān)設(shè)備,可以代替病毒分離鑒定的一種靈敏、特異、快速非瘟檢測技術(shù)。


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一般豬場而言,只需配備非洲快速檢測試紙條,根據(jù)豬場規(guī)模配備10-50條即可,場里有異常波動,就可以及時現(xiàn)場檢測。一定注意取樣方法及注意事項,注意消毒。如果不幸檢測到疑是非洲陽性的樣本,建議再反復(fù)多卡檢測看看,基本上可以做到百i分百準(zhǔn)確率。廣州勱博--博日養(yǎng)豬場全自動核酸提取純化系統(tǒng)實時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進(jìn)行模板的擴(kuò)增。要是不放心,再送檢相關(guān)部分去做PCR檢測。豬場一線需要快速檢測技術(shù)以盡早確診,做到早處理、早隔離,但要明確的是,豬場只需要通過合適的檢測工具,幫助“定性”即可,不需要深入定量分析,有問題直接捕殺無害化處理。

廣州勱博--屠宰場熒光定量PCR

磁珠法核酸提取,具有傳統(tǒng)DNA提取方法無法比擬的優(yōu)勢,主要體現(xiàn)在:①能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、大批量操作,符合生物學(xué)高通量的操作要求,使得傳i染性疾病爆發(fā)時能夠進(jìn)行快速及時的應(yīng)對,這一特點使得傳統(tǒng)方法望塵莫及;96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。②操作簡單、用時短,整個提取流程只有四步,大多可以在36-40分鐘內(nèi)完成;③安全無毒,不使用傳統(tǒng)方法中的氯i仿等有毒試劑,對實驗操作人員的傷害減少到少,完全符合現(xiàn)代環(huán)保理念;④磁珠與核酸的特異性結(jié)合使得提取的核酸純度高、濃度大。


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廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠熒光定量PCR

相對定量可以對每個樣本中模版的其實水平之間的差異進(jìn)行精i確比較,沒必要知道模版的確切拷貝數(shù),并且樣本模板中的相對水平不用使用標(biāo)準(zhǔn)曲線就可以確定。相對定量分析以實時PCR方式執(zhí)行,在實時PCR分析過程中,PCR基因擴(kuò)增一直在監(jiān)控中,在PCR進(jìn)行期間進(jìn)行數(shù)據(jù)采集,而不是在PCR結(jié)束時(終點PCR)才獲取數(shù)據(jù)。在實時PCR中,反應(yīng)是在目標(biāo)的擴(kuò)增早被監(jiān)測到時用循環(huán)中的時間點來描述的,而不是在PCR結(jié)束時通過目標(biāo)的累計數(shù)來描述。夏秋季節(jié)消毒沒什么問題,但到了冬天,他們?nèi)匀辉谏嵬庋粝?,這樣的效果是很差的。

廣州勱博--博日非洲病毒快速檢測試劑盒

在PCR反應(yīng)體系中,加入過量SYBR熒光染料,SYBR熒光染料非特異性地?fù)饺隓NA雙鏈后,發(fā)射熒光信號,而不摻入鏈中的SYBR染料分子不會發(fā)射任何熒光信號,從而保證熒光信號的增加與PCR產(chǎn)物的增加完全同步。SYBR僅與雙鏈DNA進(jìn)行結(jié)合,因此可以通過溶解曲線,確定PCR反應(yīng)是否特異。因為病原體往往附著于其他物質(zhì)上面或中間,消毒i藥與病原接觸需要先滲透,而滲透則需要時間,有時時間會很長。


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