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食品加工公司熒光定量PCR常用指南

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發(fā)布時間:2020-08-22 04:56  






廣州勱博儀器有限公司產(chǎn)品服務(wù)包括:非洲病毒檢測、核酸提取純化、PCR、熒光定量PCR、檢測、非洲檢測、全自動核酸提取純化系統(tǒng)、病毒核酸提取系統(tǒng)、非洲病毒快速檢測試劑盒。如果其他尚未被評估的原料符合以下標(biāo)準(zhǔn)就更有利于病毒存活:蛋白質(zhì)含量高(特別是天然蛋白質(zhì))、豬源、相對表面積較大質(zhì)量(比)、含有載體的微成分。我們的客戶對象是食品企業(yè)/公司/廠、食品加工企業(yè)/公司/廠、冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠、養(yǎng)殖場、養(yǎng)豬場、屠宰場、生豬屠宰場。

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PCR反應(yīng)過程中產(chǎn)生的DNA拷貝數(shù)是呈指數(shù)方式增加的,隨著反應(yīng)循環(huán)數(shù)的增加,終PCR反應(yīng)不再以指數(shù)方式生成模板,從而進(jìn)入平臺期。還有,由于PCR反應(yīng)和檢測都在反應(yīng)管中進(jìn)行,樣品污染的幾率大大降低,無需擴(kuò)增后的實驗操作。在傳統(tǒng)的PCR中,常用凝膠電泳分離并用熒光染色來檢測PCR反應(yīng)的終擴(kuò)增產(chǎn)物,因此用此終點法對PCR產(chǎn)物定量存在不可靠之處。在real-time Q-PCR中,對整個PCR反應(yīng)擴(kuò)增過程進(jìn)行了實時的監(jiān)測和連續(xù)地分析擴(kuò)增相關(guān)的熒光信號,隨著反應(yīng)時間的進(jìn)行,監(jiān)測到的熒光信號的變化可以繪制成一條曲線。

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在PCR反應(yīng)早期,產(chǎn)生熒光的水平不能與背景明顯地區(qū)別,而后熒光的產(chǎn)生進(jìn)入指數(shù)期、線性期和終的平臺期,因此可以在PCR反應(yīng)處于指數(shù)期的某一點上來檢測PCR產(chǎn)物的量,并且由此來推斷模板i初的含量。生豬屠宰廠(場)連接著生豬產(chǎn)銷等上下游環(huán)節(jié),便于“順藤摸瓜”及時發(fā)現(xiàn)和追溯潛在風(fēng)險。為了便于對所檢測樣本進(jìn)行比較,在real-time Q-PCR反應(yīng)的指數(shù)期,首先需設(shè)定一定熒光信號的域值,一般這個域值(threshold)是以PCR反應(yīng)的前15個循環(huán)的熒光信號作為熒光本底信號(baseline),熒光域值的缺省設(shè)置是3~15個循環(huán)的熒光信號的標(biāo)準(zhǔn)偏差的10倍。


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熒光定量PCR技術(shù)產(chǎn)生并成熟于上世紀(jì)90年代,由于該技術(shù)實現(xiàn)了PCR從定性到定量的飛躍,能夠?qū)CR反應(yīng)的全過程進(jìn)行實時監(jiān)控,并且自動化程度高,所以該技術(shù)從產(chǎn)生到現(xiàn)在短短的十幾年時間,在科研及檢驗領(lǐng)域獲得了廣泛的應(yīng)用,成為分子生物學(xué)領(lǐng)域不可或缺的一項重要技術(shù)。廣州勱博--病毒核酸提取系統(tǒng)銷售一個豬場對進(jìn)場人員的衣物進(jìn)行熏蒸消毒,專門制作了一個消毒柜,但由于開始設(shè)計不理想,消毒柜太大,無法進(jìn)入屋內(nèi),就放在了舍外。熒光定量PCR技術(shù)是在PCR反應(yīng)體系中加入熒光基團(tuán),利用熒光信號隨著PCR反應(yīng)的積累來實時監(jiān)控PCR反應(yīng)的進(jìn)程,并通過分析軟件對PCR的反應(yīng)進(jìn)行檢測分析的技術(shù)。系統(tǒng)組成:定量PCR儀、電腦、分析軟件、試劑及耗材。

廣州勱博--養(yǎng)豬場檢測

進(jìn)行熒光定量PCR體系的配制時i好在冰上進(jìn)行,操作環(huán)境不用非得在超凈臺中進(jìn)行,環(huán)境安靜整潔都可以。因為每一個梯度要做三個重復(fù),因此先在1ml的無菌離心管中配制好后再分裝入96孔板中。還有的在入舍消毒池中,只是例行把水和火堿放進(jìn)去,也不攪拌,火堿靠自身溶解需要較長時間,那剛放好的消毒水的作用就不確實了。實驗中我使用過熒光定量八聯(lián)管和96孔板,個人推薦96孔板。因為八聯(lián)管你需要蓋上蓋子,而且蓋子比較的難按下去,稍不慎就把八聯(lián)管弄斷或者液體撒出來。有的時候一下忘記了是從哪邊開始的。96孔板比較方便,加完樣品后只需附上一層膜,用它自帶的板子撫平即可。上機(jī)器前i好離心一下,讓貼在管壁上的液體流下來同時也消掉氣泡。


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根據(jù)動物防疫法及其配套規(guī)章規(guī)定,縣級動物衛(wèi)生監(jiān)督機(jī)構(gòu)依法向屠宰場派駐(出)官i方獸醫(yī)實施屠宰檢疫。廣州勱博--冷凍食品加工企業(yè)/公司/廠核酸提取純化一般而言,熒光擴(kuò)增曲線可以分成三個階段:熒光背景信號階段,熒光信號指數(shù)擴(kuò)增階段和平臺期。按照生豬屠宰檢疫規(guī)程和相關(guān)規(guī)定,屠宰檢疫內(nèi)容包括傳i染病和寄i生蟲病,檢疫流程包括生豬進(jìn)入屠宰廠(場、點)監(jiān)督查驗、檢疫申報、宰前檢查、同步檢疫、檢疫結(jié)果處理以及檢疫記錄等。在非洲防控期間,官i方獸醫(yī)監(jiān)督屠宰企業(yè)開展非洲自檢,對沒有開展自檢的屠宰企業(yè),對屠宰后的生豬產(chǎn)品一律不得出具動物檢疫證明。

廣州勱博--博日養(yǎng)殖場熒光定量PCR

實時熒光定量PCR(real-time quantitativePCR)/QRT-PCR,是指在PCR反應(yīng)體系中加入熒光標(biāo)記物,利用熒光信號積累實時監(jiān)測整個PCR進(jìn)程,后通過擴(kuò)增曲線對未知模板進(jìn)行定量分析的方法。廣州勱博--博日養(yǎng)豬場全自動核酸提取純化系統(tǒng)實時熒光定量PCR的基本原理:理論上,PCR過程是按照2n(n代表PCR循環(huán)的次數(shù))指數(shù)的方式進(jìn)行模板的擴(kuò)增。一般用于mRNA轉(zhuǎn)錄水平的定量研究、不同樣本或基因組中DNA拷貝數(shù)的測定、基因芯片結(jié)果驗證、藥i效分析等。金開瑞采用SYBR熒光染料法及TaqMan探針法進(jìn)行熒光定量PCR檢測,從引物設(shè)計到檢測一次性完成,提供2種常用的內(nèi)參引物及免費(fèi)的專業(yè)數(shù)據(jù)分析,每個樣品設(shè)置至少三個平行對照,保證結(jié)果的準(zhǔn)確可靠。


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