廣州碩譜生物科技有限公司氨丙基SPE柱批發(fā)

SPE小柱的應(yīng)用原理

固相萃取(SPE)技術(shù)是隨著樣品預(yù)處理要求的逐漸提高而被廣泛應(yīng)用的。?回收率低在一次完整的SPE操作中，目標(biāo)化合物可能會(huì)存在于樣品溶液流出液、淋洗液、洗脫液或吸附劑中，當(dāng)“目標(biāo)物沒有回收或回收率低”現(xiàn)象發(fā)生時(shí)，可向樣品溶液加入標(biāo)液，然后進(jìn)行完整的SPE操作并將樣品流出液、淋洗液和洗脫液分別收集并分析。樣品經(jīng)選擇性吸附和洗脫后，進(jìn)行富集分離。通常采用的方法是使液體樣品經(jīng)過吸附劑，保留其中的被測物質(zhì)，然后選擇適當(dāng)強(qiáng)度的溶劑沖去雜質(zhì)，然后用少量的溶劑對(duì)被測物質(zhì)進(jìn)行洗脫，從而實(shí)現(xiàn)快速分離、凈化和濃縮。還可以選擇性地吸附干擾雜質(zhì)，讓被測物質(zhì)外流；或者同時(shí)吸附雜質(zhì)和被測物質(zhì)，再用適當(dāng)?shù)娜軇┻x擇性地洗脫。

硅填料的粘接和封尾意味著什么？

硅膠填充物是不衍生的硅膠，通常作為所有硅膠結(jié)合相的基體。

在純硅膠 Si表面的親水硅醇基通過硅1烷化反應(yīng)，形成疏水性烷1基或芳香基基團(tuán)，從而改變填料的極性。例如，C18填料是將十八烷1基的長鏈與硅膠表面連接。

硅膠鍵合相中存在一定數(shù)量的未反應(yīng)硅醇基，從而導(dǎo)致次生相互作用。3）淋洗--zui大程度除去干擾物（建議此過程結(jié)束后把小柱完全抽干）。這種次生相互作用對(duì)于提取或保留強(qiáng)極性物或污染物十分有用，但對(duì)分析物的吸附也可能是不可逆轉(zhuǎn)的。為減小未反應(yīng)硅醇基的影響，通常是在鍵合反應(yīng)之后，用封端劑鈍化填料，這個(gè)過程稱為封尾。

正相模式是指SPE小柱固定相極性大于流動(dòng)相極性的分離模式。

常見的極性固定相有：硅膠，氧化鋁，弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強(qiáng)度也逐漸增大。離子交換固相萃取適用于可解離成帶電離子的化合物，其機(jī)理是利用帶電荷的目標(biāo)化合物離子與帶相反電荷的吸附劑之間的靜電吸引力。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)物。

為何 SPE小柱操作強(qiáng)調(diào)流速？

SPE小柱填料充填壓實(shí)后，形成柱床，當(dāng)溶劑流過小柱時(shí)，速度過快會(huì)產(chǎn)生兩個(gè)問題：一是對(duì)粘結(jié)相填料而言，由于流速過快，使其不能充分浸潤舒展，從而使其保持活性降低；二是流速過快會(huì)使小柱形成溝槽，使其未充分浸潤，從而降低吸附填料與樣品的接觸面積，影響目標(biāo)物質(zhì)的傳質(zhì)過程，從而降低回收率。對(duì)于以上反相色譜柱，我們?cè)谑褂眉熬S護(hù)的時(shí)候可以按照同樣的操作方式：1、在條件允許情況下，在使用前zui好對(duì)新色譜柱按照說明書方法進(jìn)行柱效測試。當(dāng)柱流速度為0.5-3.0 mL/min時(shí)，通常不會(huì)產(chǎn)生溝槽效應(yīng)，且溝槽的形成與柱床高度有關(guān)；當(dāng)柱流速度為0-3.0 mL/min時(shí)，由于橫截面積較大，柱床較低，溝槽效應(yīng)較小，因而適用于高流速條件下的大體積水樣的富集；當(dāng)離子交換和特定吸附作用時(shí)，填料和分析靶物的作用時(shí)間較長，控制流速可保證良好的保留效果。

絕大多數(shù)的樣品都是用保留目標(biāo)物的模式凈化的，下面舉個(gè)例子：

食品中乙1二胺四乙1酸二鈉的檢測，樣品經(jīng)提取，絡(luò)合后，凈化；

SPE柱：月旭 Welchrom?SAX 150mg/6mL；

活化：5 mL 甲1醇、5 mL 水，棄去；

上樣：待凈化液全部上樣，控制流速，不宜過快，棄去；

淋洗：依次用5mL水，5mL甲1醇淋洗，抽干；

洗脫：5mL5%甲酸甲1醇水洗脫，抽干，收集洗脫液定容至5mL，過0.22μm濾膜，供液相色譜儀測定。

為什么 HLB小柱子不同于傳統(tǒng)的硅膠連接C18，廠商建議可不激1活平衡？

回答： SPE小柱活化平衡的目的有兩個(gè)，一是使功能團(tuán)填料的粘附性和伸縮性保持對(duì)目標(biāo)化合物的zui大吸附活性，另一個(gè)目的是去除填料本身可能引入的雜質(zhì)。其中，spe柱是典型的固相萃取方式，其主要作用是吸附被稱為目標(biāo)物吸附的化合物。硅膠鍵合C18，是一種在硅膠微球表面粘接的疏水性C18官能團(tuán)，為使其對(duì)目標(biāo)物保持充分吸附活性，需要在濕潤環(huán)境上樣物在填料表層形成的液膜(活化平衡)和上樣物的溶劑分子之間具有良好的相容性，目標(biāo)物在膜間進(jìn)行傳質(zhì)，與粘合C18發(fā)生疏水作用而保留，C18本身不具有水浸潤性，直接上樣物，C18蜷縮，且由于高度的疏水性，使其難以與目標(biāo)物中的目標(biāo)物分子充分接觸，因此必須充分保留 HLB小柱內(nèi)的目標(biāo)物分子， HLB采用聚合物改性材料，添加親水基團(tuán)，使其在上樣物溶劑中與目標(biāo)物分子充分接觸。

固相萃取技術(shù)的復(fù)雜、難搞也是人所共知，下面列舉了一些固相萃取操作中的常見的問題及解決辦法，希望能對(duì)你的固相萃取操作有所幫助。

以下是固相萃取操作中常見的問題：

一、回收率低；

二、萃取重現(xiàn)性差；

三、凈化效果不理想；

四、SPE柱流速過低。

正相作用機(jī)理：

常見的極性固定相萃取材料包括：硅膠、氧化鋁、弗羅里硅土及含有qing基（CN）、氨基（NH2）、二醇基（2OH）的鍵合硅膠。

正相固相萃取模式下，溶劑體系的極性應(yīng)按照樣品溶劑、淋洗溶劑、洗脫溶劑的順序逐漸升高，它們的洗脫強(qiáng)度也逐漸增大。必須保證選擇的樣品溶劑不能將目標(biāo)化合物洗脫，選擇的淋洗液應(yīng)在不洗脫目標(biāo)化合物的前提下zui大限度地洗脫干擾物，所以洗脫液應(yīng)能恰好完全洗脫目標(biāo)化合物。結(jié)果表明：SPE正相萃取后，樣品基質(zhì)多為弱極性，如正己烷、二氯甲1烷、菜油等，而目標(biāo)物多含有極性官能團(tuán)。