蛋白質(zhì)結(jié)晶涉及四個(gè)重要步驟

1. 蛋白質(zhì)純度的確定。如果不夠非常純，必須要進(jìn)一步純化。

2. 蛋白質(zhì)溶解于合適的溶劑中，從中它能通過(guò)一種鹽或有機(jī)化合物而析出。溶劑通常是水-緩沖劑溶液，有時(shí)加，如2--2，4-（MPD）。正常情況下，沉淀劑也被加入，但是濃度不高于使沉淀產(chǎn)生。對(duì)于不溶于水-緩沖劑或水-的膜蛋白，還需要加入去污劑。

3. 使溶液過(guò)飽和。在這一步中，小聚集體形成，它是晶體生長(zhǎng)所需的核。對(duì)小分子的結(jié)晶來(lái)說(shuō)，相比于蛋白質(zhì)更為人熟知，晶核的自發(fā)形成需要提供表面張力能。一旦這個(gè)能障被突破了，晶體開(kāi)始生長(zhǎng)。能障在高水平的過(guò)飽和度時(shí)很容易克服。因此，在高過(guò)飽和度時(shí)，晶核更易自發(fā)形成。晶核的形成可作為一個(gè)過(guò)飽和度和其他參數(shù)的函數(shù)通過(guò)多種方法來(lái)研究，包括光散射、熒光去極化及電子顯微鏡。

4. 一旦晶核形成，晶體生長(zhǎng)正式開(kāi)始。對(duì)低分子量的化合物而言，新分子會(huì)逐步結(jié)合到正在生長(zhǎng)的晶體表面。這是由于這些位置的結(jié)合能比較大，相對(duì)于分子結(jié)合到平滑的表面。這些步驟要么由晶系缺陷造成，要么發(fā)生在表面隨機(jī)形成的晶核。

蛋白結(jié)晶板研究實(shí)驗(yàn)

相對(duì)于傳統(tǒng)的蛋白質(zhì)結(jié)晶中實(shí)驗(yàn)研究以及模擬研究所針對(duì)的單晶體尺度,本主要在過(guò)程尺度上對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程中晶體群體的生長(zhǎng)行為進(jìn)行了系統(tǒng)的模型化和實(shí)驗(yàn)研究. 蛋白質(zhì)晶體的形狀以及產(chǎn)品的粒度分布是衡量結(jié)晶產(chǎn)品質(zhì)量的主要指標(biāo),但是目前對(duì)蛋白質(zhì)結(jié)晶的群體粒數(shù)衡算模型的研究還非常少,而且只能模擬粒度分布。

蛋白結(jié)晶板

首先探索了基于SU-8負(fù)性光刻膠的雙層芯片模具制作工藝,另外,為了在微流控芯片中形成均勻分散的蛋白液滴,我們對(duì)基于PDMS(聚二硅氧烷)的微流控芯片的表面性質(zhì)進(jìn)行了研究,分別觀察和評(píng)價(jià)了不同鍵合方法所制作液滴型PDMS微流控芯片應(yīng)用于制備油包水和水包油兩種液滴分散體系的效果;實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示熱擴(kuò)散鍵合方法適用于制作油包水型PDMS液滴型微流控芯片,而等離子鍵合方法制作的PDMS芯片適于形成水包油型的液滴分散體系。為了實(shí)現(xiàn)芯片中樣品液滴的有效操控和分配,我們?cè)谖⒘骺匦酒屑闪丝諝忾y結(jié)構(gòu)。

蛋白質(zhì)晶體板介紹使用

通過(guò)紅外光譜,掃描電鏡,X射線衍射對(duì)產(chǎn)物的晶型,形貌及物相進(jìn)行了詳細(xì)表征,初步探討了文石晶體形成機(jī)理及生長(zhǎng)機(jī)理。本文研究的主要內(nèi)容及所獲得的結(jié)論如下:1.常溫常壓下,以竹蟶韌帶纖維狀蛋白質(zhì)為基底,采用氣體擴(kuò)散法可以在較大的條件范圍內(nèi)合成出純文石晶體:即稀硫酸濃度0.1mol-L-1,NH4HCO3粉末19.0g,CaCl2濃度0.9-9.0mmol·L-1,溶液高度10-30mm,反應(yīng)溫度20-30℃,結(jié)晶時(shí)間3-12小時(shí)。而空白對(duì)照(以玻璃蓋玻片為基底)制備出的晶體主要為菱形方解石,還有少量文石和球文石。