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從脫氣機(jī)出來的流動(dòng)相進(jìn)入高壓泵許多情況下，泵的問題都反映在壓力上，壓力波動(dòng)是常見的一類問題，泵的正常壓力波動(dòng)一般在2%以內(nèi)，這個(gè)異常波動(dòng)通常是由于氣泡和鹽引起的：如果流動(dòng)相中的氣泡沒有被脫氣機(jī)除掉，那么就會(huì)引起壓力波動(dòng)，通常我們可以通過重新 purge流和再脫氣流來解決。由于鹽引起的波動(dòng)，主要是由于流動(dòng)相中添加了濃度較高的緩沖鹽，在含鹽流動(dòng)相和有機(jī)相中，鹽會(huì)發(fā)生微小的析出，從而引起壓力異常波動(dòng)，解決這些問題可以考慮適當(dāng)降低鹽的濃度，或者用代替有機(jī)相。若因各種原因必須使用此流動(dòng)相，可考慮在有機(jī)相中加入一定比例的水，然后適當(dāng)提高梯度結(jié)束點(diǎn)。

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替代流動(dòng)相的過程有時(shí)會(huì)發(fā)生在泵的使用過程中，取代流動(dòng)相是指取代正相溶劑，或反過來取代溶劑的過程，這個(gè)過程重要的是與流動(dòng)相的兼容性，常用的正反相色譜溶劑是不可互溶的，所以在更換中間，一定要用異沖洗系統(tǒng)，保證管路中所有原有的溶劑都被異取代。流程繼續(xù)進(jìn)行進(jìn)樣，進(jìn)入進(jìn)樣器，進(jìn)樣器分為手動(dòng)和自動(dòng)兩類。

應(yīng)用過程中的液相色譜四個(gè)關(guān)鍵因素1、液相色譜儀本身：通常儀器本身是沒有問題的，尤其是新買回來的儀器。就儀器本身而言，重要的是儀器的檢驗(yàn)，新買回來的儀器一般都是由賣方先對(duì)儀器做系統(tǒng)的確認(rèn)工作(包括 IQ、 PQ、 OQ)，確認(rèn)順利通過后，再請(qǐng)國家或省級(jí)儀器檢定局的來校驗(yàn)，檢定合格后再用，檢定合格后再用，除此之外，還可以放心使用，此外，還可為儀器的正常使用提供保障。2、色譜條件：通常的色譜條件包括流動(dòng)相、色譜柱、檢測波長、流速和進(jìn)樣量。移動(dòng)相是指在制備流動(dòng)相所用水和試劑試液時(shí)，水的電阻率一般不超過18.2兆歐，而水的電阻率不超過18.2兆歐，其原因是為了防止水和試劑試液中雜質(zhì)對(duì)色譜結(jié)果的干擾，測試液采用色譜級(jí)別。

③先用溶劑將檢測池沖洗，具體用哪種具體的試樣而定；若沖了還不行，把檢測池卸下來，看燈能量，若能量還可以(有個(gè)幾千)，可能得清洗光路。首先還是請(qǐng)工程師來清洗，因?yàn)橐謇淼牧慵谔綔y器下面有一個(gè)黑色的碎片，中間有一條縫，而且那一塊的螺絲都是八角的，卸起來很麻煩。④拿出5個(gè)樣品盤，可以看到里面有一個(gè)黑色凸起(看不清是用電筒)，平時(shí)進(jìn)樣針就是從那個(gè)地方吸的。伸手就能卸下來，里面有一個(gè)小白圈(用多了自然就黑了)，換一個(gè)新的就好了，一般只有10個(gè)才能買儀器。

先要認(rèn)識(shí)到，一般國產(chǎn)其實(shí)不需要額外的過濾處理，直接使用是沒有問題的。甚至某些固體顆粒雜質(zhì)，都可以從液相流路系統(tǒng)前端的過濾頭中排除。真正容易出現(xiàn)問題的是水中的細(xì)菌。新制純水在室內(nèi)放置數(shù)天后會(huì)產(chǎn)生細(xì)菌，而這些細(xì)菌雖然肉眼看不到，卻足以堵塞柱狀填料顆粒的空隙，導(dǎo)致柱子迅速報(bào)廢。

色譜儀是一種易學(xué)難用的儀器，尤其注重儀器的正確使用。流體工作者接觸到流動(dòng)相，流動(dòng)相是引起液相色譜各種問題的主要來源。液相色譜儀常見的故障有堵塞和漏漏。以下對(duì)這兩點(diǎn)分別展開討論。(注：流動(dòng)相以為例，色譜柱以C18為例)“堵”的現(xiàn)象是柱壓異常升高，直接原因是流路不暢。造成“堵塞”的原因：流動(dòng)相中的細(xì)菌污染。阻塞主要發(fā)生在色譜柱前端，流動(dòng)相中存在雜質(zhì)，細(xì)菌是雜質(zhì)的主要來源。長時(shí)間，濾頭粘附細(xì)菌，造成泵液不能正常工作這一問題的解決辦法就是保證水的可靠性。以下是兩種建議方法：(1)好購買實(shí)驗(yàn)室純水機(jī)，既方便又可靠，質(zhì)量也放心。的缺點(diǎn)是價(jià)格昂貴。(2)成箱購買市售品牌純凈水，如怡寶或娃哈哈500 ml，這些水的質(zhì)量足以滿足液相色譜的要求。有一個(gè)細(xì)節(jié)值得注意：在絕大多數(shù)書籍中，凡談到配制流動(dòng)相到都要進(jìn)行過濾的步驟。