傳統(tǒng)小分子特異性antibody制備技術(shù)

為解決小分子這類半抗原物質(zhì)無法刺激宿主動物產(chǎn)生antibody的特性，必須將半抗原回復(fù)完全抗原的特性。解決這個問題可以通過將小分子和對宿主動物immune原性很強的物質(zhì)：如OVA、BSA、KLH等偶聯(lián)，將其制備成完全抗原，通過immune宿主動物，便能促使宿主動物產(chǎn)生針對小分子的特異性antibody，這類antibody通過抗原特異性的篩選便能獲取目的antibody。目前，通過此項技術(shù)能解決絕大多數(shù)小分子特異性antibody的制備，但是也可能由于小分子的結(jié)構(gòu)特異，偶聯(lián)物和偶聯(lián)方式的選取、偶聯(lián)率的差異以及immune技術(shù)有待發(fā)展等多方面的因素使其特異性antibody的制備存在困難。

隨著基因組測序、分子生物學(xué)檢測手段的快速發(fā)展，PCR和熒光定量PCR實驗，正在越來越多的實驗室應(yīng)用。然而，PCR作為一種高靈敏度的檢測手段，PCR的實驗結(jié)果也容易被各種無關(guān)的外源性DNA或RNA所干擾。

PCR實驗室中，很容易發(fā)生DNA的交叉污染，污染通常來自于離心管、移液器和其他試驗設(shè)備產(chǎn)生的DNA氣溶膠，或DNA溶液污染桌面，或吸樣槍不慎將樣品或模板核酸吸入槍內(nèi)。據(jù)估算，一個氣溶膠顆?？珊?8000個DNA拷貝。 因此，為保證PCR試驗的數(shù)據(jù)準(zhǔn)確，避免交叉污染，應(yīng)定期對PCR實驗室做DNA污染情況的監(jiān)測。

用乙醇沉淀DNA時為什么一定要加NaAc或NaCl

　　在pH為8左右的溶液中，DNA分子是帶負(fù)電荷的，加一定濃度的NaAc或NaCl，使Na 中和DNA分子上的負(fù)電荷， 減少DNA分子之間的同性電荷相斥力，易于互相聚合而形成DNA鈉鹽沉淀，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太低時， 只有部分DNA形成DNA鈉鹽而聚合，這樣就造成DNA沉淀不完全，當(dāng)加入的鹽溶液濃度太高時， 其效果也不好。在沉淀的DNA中，由于過多的鹽雜質(zhì)存在，影響DNA的酶切等反應(yīng)，必須要進行洗滌或重沉淀。

　　加核糖核酸酶降解核糖核酸后，為什么再要用SDS與KAc來處理?

　　加進去的RNase本身是一種蛋白質(zhì)，為了純化DNA，又必須去除之，加SDS可使它們成為SDS-蛋白復(fù)合物沉淀，再加KAc使這些復(fù)合物轉(zhuǎn)變?yōu)槿芙舛雀〉拟淃}形式的SDS-蛋白質(zhì)復(fù)合物，使沉淀更加完全。也可用飽和酚、*抽提再沉淀，去除RNase。在溶液中，有人以KAc代替NaAc，也可以收到較好效果。

　　在基因操作實驗中，磷酸鹽緩沖系統(tǒng)(pKa=7.2)和硼酸系統(tǒng)(pKa=9.24)等雖然也都符合細(xì)胞內(nèi)環(huán)境的生理范圍(pH)，可作DNA的保存液，但在轉(zhuǎn)化實驗時，磷酸根離子的種類及數(shù)量將與Ca2 產(chǎn)生Ca3(PO4)2沉淀，在DNA反應(yīng)時，不同的酶對輔助因子的種類及數(shù)量要求不同，有的要求高離子濃度，有的則要求低鹽濃度，采用Tris-HCl(pKa=8.0)的緩沖系統(tǒng)，由于緩沖液是TrisH /Tris，不存在金屬離子的干擾作用，故在提取或保存DNA時，大都采用Tris-HCl系統(tǒng)，而TE緩沖液中的EDTA更能穩(wěn)定。