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從脫氣機(jī)出來(lái)的流動(dòng)相進(jìn)入高壓泵許多情況下，泵的問(wèn)題都反映在壓力上，壓力波動(dòng)是常見(jiàn)的一類(lèi)問(wèn)題，泵的正常壓力波動(dòng)一般在2%以內(nèi)，這個(gè)異常波動(dòng)通常是由于氣泡和鹽引起的：如果流動(dòng)相中的氣泡沒(méi)有被脫氣機(jī)除掉，那么就會(huì)引起壓力波動(dòng)，通常我們可以通過(guò)重新 purge流和再脫氣流來(lái)解決。由于鹽引起的波動(dòng)，主要是由于流動(dòng)相中添加了濃度較高的緩沖鹽，在含鹽流動(dòng)相和有機(jī)相中，鹽會(huì)發(fā)生微小的析出，從而引起壓力異常波動(dòng)，解決這些問(wèn)題可以考慮適當(dāng)降低鹽的濃度，或者用代替有機(jī)相。若因各種原因必須使用此流動(dòng)相，可考慮在有機(jī)相中加入一定比例的水，然后適當(dāng)提高梯度結(jié)束點(diǎn)。

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替代流動(dòng)相的過(guò)程有時(shí)會(huì)發(fā)生在泵的使用過(guò)程中，取代流動(dòng)相是指取代正相溶劑，或反過(guò)來(lái)取代溶劑的過(guò)程，這個(gè)過(guò)程重要的是與流動(dòng)相的兼容性，常用的正反相色譜溶劑是不可互溶的，所以在更換中間，一定要用異沖洗系統(tǒng)，保證管路中所有原有的溶劑都被異取代。流程繼續(xù)進(jìn)行進(jìn)樣，進(jìn)入進(jìn)樣器，進(jìn)樣器分為手動(dòng)和自動(dòng)兩類(lèi)。

六通閥的正確使用與維護(hù)①樣品進(jìn)樣前，要用0.45μ的濾膜過(guò)濾，以減少微粒對(duì)進(jìn)樣閥的磨損。②旋轉(zhuǎn)閥芯時(shí)不要太慢，不要停留在中間位置，否則流動(dòng)相受阻，使泵內(nèi)壓力急劇上升，甚至超過(guò)了泵的壓力；再轉(zhuǎn)到進(jìn)樣位置，過(guò)高的壓力會(huì)使柱頭損壞。③為了防止進(jìn)樣閥內(nèi)的緩沖鹽及樣品殘留，每次分析結(jié)束后應(yīng)沖洗進(jìn)樣閥。一般可采用清水沖洗，或先用溶樣溶劑沖洗，再用清水沖洗。

有關(guān)流動(dòng)相1.無(wú)過(guò)濾的流動(dòng)相由于柱塞、密封環(huán)、氣缸體和單向閥等雜質(zhì)顆粒都會(huì)磨損，因此，應(yīng)該預(yù)先清除流動(dòng)相中的任何固體顆粒。好的流動(dòng)相是在玻璃容器中蒸餾，而通常的過(guò)濾方法是濾過(guò)，可以使用 Millipore濾膜(0.2μ m或0.45μ m)等過(guò)濾器。泵入口處應(yīng)接砂濾棒(或片)。應(yīng)該經(jīng)常清洗或更換輸液泵的濾器。泵用后不能及時(shí)清洗移動(dòng)相中不得含有腐蝕性物質(zhì)，含有緩沖液的流動(dòng)相不能留在泵中，特別是當(dāng)泵停泵過(guò)夜或更久時(shí)。若含有緩沖液的流動(dòng)相留在泵中，可能會(huì)析出鹽的微晶，如上述固體顆粒那樣損壞密封環(huán)和柱塞，甚至只是因?yàn)槿芤禾幱陟o止?fàn)顟B(tài)時(shí)，會(huì)析出。所以，必須用純水將泵完全清洗干凈，然后換成適合于保存色譜柱和有利于泵維護(hù)的溶劑(對(duì)于反相鍵合硅膠固定相，可能是或-水)。

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柱材的選擇應(yīng)根據(jù)待分析的樣品性質(zhì)和試驗(yàn)條件確定。若要分析的樣品易分解或有腐蝕性，應(yīng)考慮使用玻璃管或聚四氟乙烯管。玻璃管柱的優(yōu)點(diǎn)是化學(xué)惰性好，制備的柱子柱效高，便于觀察柱子的填充，而玻璃管易碎是其缺點(diǎn)。PTFE管的優(yōu)點(diǎn)是耐腐蝕，缺點(diǎn)是不耐高溫高壓。目前填充柱中通常采用 zui不銹鋼管。其優(yōu)點(diǎn)是不破碎，傳熱性好，柱壽命長(zhǎng)，可滿足一般樣品分析要求。其缺點(diǎn)是內(nèi)壁較粗糙，活性較大，很難清洗干凈。

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在使用前應(yīng)對(duì)填充柱進(jìn)行清洗處理，并進(jìn)行試漏檢測(cè)。清潔方法與管柱材料有關(guān)。對(duì)不銹鋼管，一般采用10%熱浸泡，抽去管內(nèi)壁的油污，再用自來(lái)水洗凈。若使用1:20的稀鹽酸溶液重復(fù)處理，則可明顯降低對(duì)柱內(nèi)壁的吸附。玻璃柱子的清潔可參考上述方法，不同的是一般用洗液浸泡。類(lèi)似地，為了降低玻璃的內(nèi)壁活性，可用5%二二氯硅i烷的溶液浸漬處理，然后用和分別洗凈。氣柱檢漏方法比較簡(jiǎn)單：可將柱子泡在水中，堵死柱的一端，在另一端通氣，若無(wú)氣泡冒出，則說(shuō)明柱子無(wú)泄漏現(xiàn)象。

固相萃取柱填料：

固相萃取填料通常是色譜吸附劑，可以分為三大類(lèi)：第i一類(lèi)是以硅膠為基質(zhì)(如C18、C8等)；第二類(lèi)是聚苯乙i烯-二乙烯苯等無(wú)機(jī)材料，如聚苯乙i烯-二乙烯苯等；另一類(lèi)是以硅藻土、氧化鋁、石墨化碳等為主要原料。

固相萃取柱容量：

柱的容量必須考慮到固相萃取柱的選擇。因?yàn)槲覀兯鎸?duì)的樣品基體往往比較復(fù)雜，如食物、生物樣品等。固相萃取中，固相萃取吸附劑吸附目標(biāo)化合物的同時(shí)，也吸附類(lèi)似性質(zhì)的雜質(zhì)。所以在考慮柱容量時(shí)，應(yīng)是總目標(biāo)化合物加可吸附雜質(zhì)含量不能超過(guò)柱容量。反之，可能會(huì)有部分目標(biāo)化合物在載樣過(guò)程中不能被吸附，導(dǎo)致回收率較低。

固體萃取柱的用途：

大多數(shù)的固相萃取都是通過(guò)人工來(lái)完成的，即在固相萃取柱的上端連接一個(gè)注i射器，在注i射器的擠壓下萃取柱中的液體被擠出。此外，也可采用正壓力或負(fù)壓力的固相萃取設(shè)備對(duì)批量樣品進(jìn)行固相萃取。伴隨著技術(shù)的發(fā)展，樣品量的不斷增加，越來(lái)越多的分析實(shí)驗(yàn)室開(kāi)始采用自動(dòng)固相萃取儀，尤其是多通道固相萃取儀。