ELISA試劑盒的分類

檢測(cè)抗體及酶結(jié)合物的稀釋度合適(均為1:30), 方便試驗(yàn)操作者準(zhǔn)確地做稀釋工作，保證實(shí)驗(yàn)結(jié)果的重復(fù)性。

Elisa試劑盒的注意事項(xiàng)

Elisa試劑盒是否滅活：加熱可滅清中補(bǔ)體系統(tǒng)，在較少數(shù)情況下（培養(yǎng)ES細(xì)胞，平滑肌細(xì)胞時(shí)）建議滅活，在培養(yǎng)其余細(xì)胞時(shí)不建議滅清。滅活非常容易產(chǎn)生沉淀，如必須滅活請(qǐng)按56℃，30 min，輕微搖晃原則操作，滅活溫度高、時(shí)間長(zhǎng)、搖晃不均都容易產(chǎn)生沉淀。

Elisa試劑盒培養(yǎng)基：無(wú)培養(yǎng)基在結(jié)果重復(fù)性、細(xì)胞體外分化方面有優(yōu)勢(shì)，但是，仍然是培養(yǎng)液中基本的添加物，尤其是在原代培養(yǎng)或細(xì)胞生長(zhǎng)狀態(tài)不良時(shí)，常常會(huì)先使用有的培養(yǎng)液進(jìn)行培養(yǎng)，待細(xì)胞生長(zhǎng)旺盛后再換成培養(yǎng)液。

Elisa試劑盒有哪些需要注意的？

1. 跟著病況的進(jìn)展或由其他因素影響，某些在機(jī)體內(nèi)的含量發(fā)作大幅動(dòng)搖，因此有必要對(duì)標(biāo)本進(jìn)行預(yù)處理。間接法測(cè)定中，標(biāo)本恰當(dāng)稀釋還可下降非特異性反響。

2. 加樣一般運(yùn)用加液器，在ELISA試劑盒中一般有4次加樣：加標(biāo)本、加酶結(jié)合物、加底物和加間斷液。加標(biāo)本時(shí)有必要每份標(biāo)本運(yùn)用一支移液器吸嘴，避免交叉污染。加酶結(jié)合物、底物和間斷液時(shí)則不需更換吸嘴。

3.在成批手藝檢測(cè)中，還應(yīng)留神操作時(shí)差的影響。加樣及混勻時(shí)間的差異，使抗原反響和酶促反響時(shí)間不一致，對(duì)競(jìng)爭(zhēng)法及定量檢測(cè)影響很大，不留神可能會(huì)導(dǎo)致過(guò)錯(cuò)效果或定量不準(zhǔn)。

Elisa試劑盒——Elisa實(shí)驗(yàn)常見(jiàn)問(wèn)題及解決方案

顯色淡，靈敏度偏低

1  試劑盒未充分平衡 試劑盒從2～8℃冰箱取出后打開(kāi)盒蓋，于室溫平衡至少20分鐘，確保所有試劑已平衡至室溫（約25℃）

2  樣品不適合做ELISA檢測(cè) 樣品一般選擇培養(yǎng)上清、血漿。其他樣品形式可能不適合做ELISA檢測(cè)或者需要優(yōu)化檢測(cè)的條件（例如稀釋液的成分）

3  酶標(biāo)板在貯存或洗后拍干時(shí)過(guò)分干燥 防止板過(guò)于干燥

4  包被遭到破壞 操作溫和，移液槍不能碰到孔底

5  樣本和孵育條件不合適 按照說(shuō)明書條件，建議孵育過(guò)程中全程振蕩孵育。

6  洗滌浸泡時(shí)間過(guò)長(zhǎng) 按照說(shuō)明書操作。勿人為增加浸泡時(shí)間；

7  偶聯(lián)HRP試劑污染 棄去試劑，重新配置

8  錯(cuò)誤的稀釋偶聯(lián)HRP試劑 棄去試劑，重新配置

9  TMB底物孵育時(shí)間過(guò)短，因非人為因素影響，需要優(yōu)化孵育時(shí)間 確定合適的孵育時(shí)間：人為判定-高濃度的標(biāo)準(zhǔn)品出現(xiàn)深藍(lán)色；S4-5有淡藍(lán)色；機(jī)器判定620 nm波長(zhǎng)下測(cè)定OD值達(dá)到0.6-0.65

10  樣本濃度過(guò)高或存在基質(zhì)效應(yīng) 建議做不同稀釋倍數(shù)，確認(rèn)樣本稀釋倍數(shù)。

11  濾光片設(shè)置有問(wèn)題或者波長(zhǎng)選擇不對(duì) 確認(rèn)儀器設(shè)置及選擇正確的波長(zhǎng)檢測(cè)。

12  酶標(biāo)板不適合做ELISA 不能使用細(xì)胞培養(yǎng)板，建議使用ELISA高吸附力板子。