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病毒核酸提取系統(tǒng)歡迎來電「勱博儀器」

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發(fā)布時間:2021-07-01 08:29  






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在PCR擴(kuò)增中,溶液中的模板變性后低溫退火時,引物與探針同時與模板結(jié)合。廣州勱博--博日全自動核酸提取純化系統(tǒng)現(xiàn)有數(shù)據(jù)表明,在豬日糧中,豬流行性腹瀉病毒和其他外來病毒等能很好存活的原料包括:豆粕、酒糟、豬源蛋白質(zhì)、維生素預(yù)混料、氨化膽i堿、L-賴氨酸和DL-蛋氨酸。在引物的介導(dǎo)下,沿模板向前延伸至探針結(jié)合處,發(fā)生鏈的置換,Taq酶的5′-3′外切酶活性(此活性是雙鏈特異性的,游離的單鏈探針不受影響)將探針5′端連接的熒光基團(tuán)從探針上切割下來,游離于反應(yīng)體系中,從而脫離3′端熒光淬滅基團(tuán)的屏蔽,接受光刺激發(fā)出熒光信號,即每擴(kuò)增一條DNA鏈,就有一個熒光分子形成,實(shí)現(xiàn)了熒光信號的累積與PCR產(chǎn)物形成完全同步。

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直接的方法指的是標(biāo)記熒光的探針與擴(kuò)增產(chǎn)物結(jié)合后即直接產(chǎn)生熒光,分子信標(biāo)(molecular beacon)就屬于這一類,它本質(zhì)上是一種標(biāo)記熒光的發(fā)夾探針,當(dāng)探針分子呈發(fā)夾結(jié)構(gòu)時,結(jié)合在其兩端的熒光基團(tuán)距離上接近,使得產(chǎn)生能量轉(zhuǎn)移效應(yīng),而不發(fā)生熒光。廣州勱博--屠宰場熒光定量PCR磁珠法核酸提取,具有傳統(tǒng)DNA提取方法無法比擬的優(yōu)勢,主要體現(xiàn)在:①能夠?qū)崿F(xiàn)自動化、大批量操作,符合生物學(xué)高通量的操作要求,使得傳i染性疾病爆發(fā)時能夠進(jìn)行快速及時的應(yīng)對,這一特點(diǎn)使得傳統(tǒng)方法望塵莫及。當(dāng)互補(bǔ)序列出現(xiàn)時,探針與DNA雜交,探針轉(zhuǎn)變成一個開放的結(jié)構(gòu),呈線性,報告熒光基團(tuán)與淬滅熒光基團(tuán)彼此在空間上產(chǎn)生足夠的分離,熒光基團(tuán)脫離了淬滅基團(tuán)的影響,從而產(chǎn)生可被檢測到的熒光。


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熒光定量PCR樣品RNA的抽提①取凍存已裂解的細(xì)胞,室溫放置5分鐘使其完全溶解。②兩相分離 每1ml的TRIZOL試劑裂解的樣品中加入0.2ml的氯i仿,蓋緊管蓋。但磁珠法由于磁珠吸附DNA分子的不均衡、且在后續(xù)洗脫過程中會造成核酸的斷裂和損失,因此在疑難檢材的檢驗過程中,存在PCR擴(kuò)增失敗,DNA檢驗不成功的情況。手動劇烈振蕩管體15秒后,15到30℃孵育2到3分鐘。4℃下12000rpm離心15分鐘。離心后混合液體將分為下層的紅色酚氯i仿相,中間層以及無色水相上層。RNA全部被分配于水相中。水相上層的體積大約是勻漿時加入的TRIZOL試劑的60%。

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近年來,分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)發(fā)展迅速,熒光定量PCR(QF-PCR)技術(shù)、熒光原位雜交(FISH)技術(shù)、多重連接探針擴(kuò)增(MLPA)技術(shù)、實(shí)時熒光PCR技術(shù)、染色體微陣列分析(CMA)技術(shù)、產(chǎn)前液相芯片(BoBs)技術(shù)、無創(chuàng)性產(chǎn)前基因檢測(NIPT)等已逐漸成熟,并開始向臨床轉(zhuǎn)化。熒光定量PCR結(jié)果可以用于定性(判斷一段序列的有無),也可以用于定量(確定DNA拷貝數(shù)),即qPCR,而常規(guī)PCR只能做半定量。分子遺傳學(xué)診斷技術(shù)多以遺傳物質(zhì)DNA為檢測對象,不需要進(jìn)行細(xì)胞培養(yǎng),為傳統(tǒng)的細(xì)胞染色體核型分析技術(shù)提供了有效的補(bǔ)充。


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非洲(African Swine fever,ASF)是由非洲病毒(African Swine fever virus,ASFV)感i染家豬和各種(非洲、歐洲等)引起一種急性、出i血性、烈性傳i染病。隨著生物芯片技術(shù)和熒光探針定量技術(shù)的結(jié)合,熒光定量PCR在醫(yī)學(xué)檢測及其他各個領(lǐng)域中的應(yīng)用前景將更加廣闊,令人欣喜。世界動物衛(wèi)生組織(OIE)將其列為法定報告動物疫病,該病也是我范的一類動物疫情。其特征是發(fā)病過程短,急性和急性i感i染死i亡率高達(dá),臨床表現(xiàn)為發(fā)熱(達(dá)40~42℃),心跳加快,呼吸困難,部分咳嗽,眼、鼻有漿液性或粘液性膿性分泌物,皮膚發(fā)紺,淋巴i結(jié)、、胃腸粘膜明顯出血,非洲臨床癥狀與癥狀相似,只能依靠實(shí)驗室監(jiān)測確診。

廣州勱博--養(yǎng)殖場熒光定量PCR

非洲是一種傳i染性強(qiáng),危害嚴(yán)重的豬感i染病毒性疾病。非洲病毒(ASFV)通過直接或間接接觸傳播,在豬群眾傳播速度極快。廣州勱博--養(yǎng)殖場熒光定量PCR相對常規(guī)PCR而言,熒光定量PCR的主要優(yōu)點(diǎn)是準(zhǔn)確地確定初始模板拷貝數(shù)和寬的動態(tài)范圍內(nèi)和高的靈敏度。而且,該病毒在未經(jīng)烹飪的生豬相關(guān)制品中存活時間很長,這一特點(diǎn)使得非洲容易向未感i染區(qū)域傳播。由于非洲可以感i染,而軟蜱通過叮咬成為非洲主要傳播途徑之一,這也給非洲的凈化帶來難度。非洲的感i染致死率極高,接近,并且目前沒有有效的疫i苗和治i療手段。PCR技術(shù)在傳i染病診斷上具有廣泛的應(yīng)用,該技術(shù)靈敏度高,特異性強(qiáng),能夠在豬、豬產(chǎn)品及環(huán)境中病毒的“蹤跡”進(jìn)行有效的監(jiān)控,是農(nóng)業(yè)農(nóng)村部指i定的非洲首i選診斷技術(shù)。


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