PCR實驗室是分子診斷的基礎(chǔ)，也是進行PCR實驗的必備場所。近些年，分子診斷行業(yè)快速發(fā)展，對PCR的認(rèn)識又進入到了一個新的階段，但是基于實驗室的基本知識仍然是非常重要的一環(huán)。

PCR實驗室注意事項——標(biāo)本制備區(qū)

由于在樣本混合、核酸純化過程中可能會發(fā)生氣溶膠所致的污染，可通過在本區(qū)內(nèi)設(shè)立正壓條件，避免從鄰近區(qū)進入本區(qū)的氣溶膠污染。

PCR實驗室注意事項——擴增產(chǎn)物分析區(qū)

用過的吸頭也必須放至1 mol/L HCl中浸泡后再放到垃圾袋中按程序處理，如焚燒。由于本區(qū)有可能會用到某些可致基因突變和有毒物質(zhì)，故應(yīng)當(dāng)注意實驗人員的安全防護。

PCR實驗室布局

不同功能的工作區(qū)應(yīng)是分隔獨立的，各工作區(qū)有明顯的標(biāo)志，不能直通，如果緊密相連，需安裝物品傳遞窗。前兩區(qū)為擴增前區(qū)，后兩區(qū)為擴增后區(qū)，擴增前區(qū)與擴增后區(qū)應(yīng)嚴(yán)格分開。

PCR實驗室裝飾

實驗室圍護結(jié)構(gòu)應(yīng)牢固、氣密性好；所有陰陽角宜采用圓弧過渡；墻體內(nèi)壁光潔、不積塵、耐腐蝕、易清洗消毒；地面使用PVC卷材或環(huán)氧樹脂自流坪，材料應(yīng)滿足無縫隙、無滲漏、光潔、耐腐蝕的要求。

PCR實驗室注意事項

幾個區(qū)域的大小設(shè)置情況，試劑準(zhǔn)備區(qū)、擴增區(qū)、擴增產(chǎn)物分析區(qū)，空間可以相對小一些，樣品制備區(qū)要放置生物安全柜和低溫冰箱，空間應(yīng)大一些。

PCR實驗室工作基本原則

實驗室的清潔應(yīng)當(dāng)按試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)→標(biāo)本制備區(qū)→擴增區(qū)→擴增產(chǎn)物分析區(qū)的方向進行。不同的實驗區(qū)域應(yīng)當(dāng)有其各自的清潔用具以防止交叉污染。

PCR實驗室各區(qū)功能及主要設(shè)備

樣品制備區(qū)：主要進行樣品的保存、核酸(RNA、DNA)提取、貯存及其加入至擴增反應(yīng)管和測定DNA的合成。本區(qū)主要設(shè)備有冰箱、生物安全柜、離心機、加樣器、振蕩器、恒溫水浴等。

PCR實驗室原則上為試劑準(zhǔn)備區(qū)、樣品制備區(qū)、擴增區(qū)和擴增產(chǎn)物分析區(qū)四個單獨的工作區(qū)域并設(shè)有專用走廊，各工作區(qū)域應(yīng)設(shè)緩沖間，工作區(qū)與緩沖間宜安裝連鎖裝置。

PCR實驗室工作基本原則

工作結(jié)束后，必須立即對工作區(qū)進行清潔。工作區(qū)的實驗臺表面應(yīng)當(dāng)可耐受諸如化學(xué)物質(zhì)的消毒清潔作用。實驗臺表面的紫外照射應(yīng)當(dāng)方便有效。

PCR實驗室通風(fēng)系統(tǒng)及壓力控制

各區(qū)域之間應(yīng)具備單向的實驗工藝流、物流與氣流，形成單向流程的保護屏障，避免實驗之間的相互干擾，防止氣溶膠擴散對實驗過程造成污染。

PCR實驗室注意事項——試劑儲存和準(zhǔn)備區(qū)

貯存試劑和用于標(biāo)本制備的消耗品等材料應(yīng)當(dāng)直接運送至試劑貯存和準(zhǔn)備區(qū)，不能經(jīng)過擴增檢測區(qū)，試劑盒中的陽性對照品及質(zhì)控品不應(yīng)當(dāng)保存在該區(qū)，應(yīng)當(dāng)保存在標(biāo)本處理區(qū)。