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使用PD.合成細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠(凝膠、基質(zhì)凝膠)能夠帶來(lái)哪些應(yīng)用的好處?這里所說(shuō)的PD.即PhenoDrive新型合成細(xì)胞培養(yǎng)基質(zhì)膠(凝膠、基質(zhì)凝膠),經(jīng)培養(yǎng)測(cè)試該新型合成PD.細(xì)胞培養(yǎng)底物可促進(jìn)相關(guān)細(xì)胞的表型,能夠模擬更接近天然組織的微環(huán)境。但是,從科學(xué)基礎(chǔ)來(lái)看,這一發(fā)明可視為靜電霧化或電噴的一種特例,其概念可以追溯到1745年。PD.有多種配方(見(jiàn)下)可促進(jìn)以下物質(zhì)的形成:
·球體(成人和誘導(dǎo)性多能、肌肉細(xì)胞、神經(jīng)母細(xì)胞)
·肝細(xì)胞球體
·胰島
·內(nèi)皮細(xì)胞 ·上皮
·癌細(xì)胞團(tuán)塊(也引起局部缺氧 )
·神經(jīng)網(wǎng)絡(luò)
PhenoDrive在懸浮細(xì)胞培養(yǎng)中如何使用(1)?答:通過(guò)對(duì)粉末重組的方式,將PhenoDrive溶解在對(duì)要培養(yǎng)的細(xì)胞類(lèi)型具有特異性的無(wú)組織培養(yǎng)基中。將所得溶液與細(xì)胞懸液混合,以達(dá)到0.001%至1%(v / v)的終濃度。該裝置采用了靜電紡絲控制參數(shù),包括聚合物溶液的注入速度、工作距離、集氣管轉(zhuǎn)速、工作溫度文章來(lái)自于:genintech。具有細(xì)胞懸液的典型混合物的變化范圍為40,000個(gè)細(xì)胞/ mL至1,000,000個(gè)細(xì)胞/ mL,并在溫和的旋轉(zhuǎn)條件下于室溫或37°C孵育20分鐘照常播種細(xì)胞。建議通過(guò)用2D培養(yǎng)條件中所述的包衣程序中概述的相同PhenoDrive制劑預(yù)先在表面上包衣,進(jìn)一步支持PhenoDrive驅(qū)動(dòng)的細(xì)胞構(gòu)建體的播種。
利用PHENODRIVE重組溶液對(duì)聚合物3D支架進(jìn)行涂布:
如果采用乙醇溶液進(jìn)行重組, 應(yīng)確保所使用的聚合物支架不溶于乙醇 。按照粉末重組步驟, 然后用移液器移取足夠的重組溶液將支架完全覆蓋, 同樣采用自然蒸發(fā)的方法在支架的表面及空期間形成一層透明的薄膜。
注:
1、任何的中性的水介質(zhì)的溶液都可以用來(lái)對(duì)PHENODRIVE進(jìn)行重組, 包括緩沖液;
2、采用乙醇的目的是利用其揮發(fā)性來(lái)縮短溶劑蒸發(fā)的時(shí)間;
PHENODRIVE凍干粉末的使用方法:
與傳統(tǒng)的培養(yǎng)基質(zhì)膠相比, 我們的合成基質(zhì)膠使用過(guò)程極為簡(jiǎn)單, 在室溫下即可實(shí)現(xiàn)重組使用, 這里就 PHENODRIVE的標(biāo)準(zhǔn)應(yīng)用流程介紹如下:
由于PHENODRIVE 是以無(wú)菌凍干粉末狀態(tài)進(jìn)行存儲(chǔ)的, 因此在使用時(shí)需要對(duì)其進(jìn)行重組。一些電紡原料具有很好的生物相容性及可降解性,可作為載體進(jìn)入人體,并容易被吸收。實(shí)驗(yàn)人員可以根據(jù)需求,取適量的粉末將其溶解進(jìn)水、乙醇或培養(yǎng)液中, 這個(gè)過(guò)程非常簡(jiǎn)單, 待其溶解后得到無(wú)色、透明液體經(jīng)過(guò)濾后即可準(zhǔn)備用于培養(yǎng) , 這一過(guò)程即重組。重組后的液體可在-20℃ 的低溫下保存3至少3個(gè)月。
對(duì)于這類(lèi)耗材表面的涂布應(yīng)用, 通常建議將PHENODRIVE 凍干粉末溶解進(jìn)75% 的乙醇中, 按要求的濃度進(jìn)行重組, 將經(jīng)過(guò)濾的重組溶液澆鑄在需要涂布的器皿表面,并在無(wú)菌的環(huán)境下讓其自然蒸發(fā)(建議紫外線照射的無(wú)菌環(huán)境下), 待溶劑蒸發(fā)盡后, 即在器皿表面留下一層透明的薄膜,即完成涂布的過(guò)程。如何制備出適合需要的、高性能、多功能的復(fù)合納米纖維是研究的關(guān)鍵。
建議:在無(wú)情況下種植細(xì)胞, 待細(xì)胞粘附后再添加, 比如在細(xì)胞種植3小小時(shí)后。
溶解待培養(yǎng)細(xì)胞類(lèi)型的無(wú)組織培養(yǎng)基中的PHENODRIVE, 方法是按照粉末步驟配置適當(dāng)濃度的重組透明重組溶液,再將從組后的溶液與細(xì)胞懸浮液混合, 以達(dá)到0.001% ~1%(V/V)的終 PHENODRIVE 濃度。但是靜電紡纖維材料若要實(shí)現(xiàn)在上述自清潔領(lǐng)域的應(yīng)用,必須提高其強(qiáng)力、耐磨性以及纖維膜材料與基體材料的結(jié)合牢度等。細(xì)胞懸浮液的典型細(xì)胞濃度是40000個(gè)/ml ~1000000個(gè)/ml。