HPLC對流動(dòng)相的一般要求

流動(dòng)相就比如人體的血液，其質(zhì)量直接影響到整個(gè)系統(tǒng)的正常運(yùn)行與否。

© 應(yīng)該使用HPLC級的溶劑，不能互相混溶的溶劑不可以直接切換！

© 注意溶劑的截止波長。截止波長是指該溶劑可以在紫外檢測器中使用的很低波長,低于該波長后,溶劑會(huì)有很強(qiáng)的紫外吸收，從而影響極限的穩(wěn)定性、干擾對所分析物質(zhì)的檢測。

© HPLC所使用的水必須是新鮮的和經(jīng)過0.45μm濾膜過濾過的。建議每天更換新鮮的水。長期不用時(shí)，必須把使用水的管路用有機(jī)的溶劑置換，防止長霉。

© 儀器使用完后要采用適當(dāng)?shù)娜軇_洗等方法維護(hù)色譜柱和系統(tǒng)。如果使用了緩沖鹽一定先將鹽要沖洗干凈。

© 當(dāng)有流路堵塞時(shí)，可以嘗試將之反接后沖洗。污染的溶劑或溶劑瓶里的藻類生長將會(huì)縮短溶劑過濾器的使用壽命，并且影響泵和系統(tǒng)的的性能。這在水溶劑或磷酸鹽緩沖液(pH 4 至7) 中尤其如此。

HPLC靈敏度不夠的主要原因及解決辦法是什么？

①樣品量不足，解決辦法為增加樣品量

②樣品未從柱子中流出?？筛鶕?jù)樣品的化學(xué)性質(zhì)改變流動(dòng)相或柱子

③樣品與檢測器不匹配。根據(jù)樣品化學(xué)性質(zhì)調(diào)整波長或改換檢測器

④檢測器衰減太多。調(diào)整衰減即可。

⑤檢測器時(shí)間常數(shù)太大。解決辦法為降低時(shí)間參數(shù)

⑥檢測器池窗污染。解決辦法為清洗池窗。

⑦檢測池中有氣泡。解決辦法為排氣。

⑧記錄儀測壓范圍不當(dāng)。調(diào)整電壓范圍即可。

⑨流動(dòng)相流量不合適。調(diào)整流速即可。

⑩檢測器與記錄儀超出校正曲線。解決辦法為檢查記錄儀與檢測器，重作校正曲線。

高效液相色譜儀在生物制藥中的應(yīng)用

高效液相色譜儀是近幾十年發(fā)展起來的一種高效、快速的分離分析技術(shù)，是現(xiàn)代分離檢測的重要工具。高效液相色譜儀是以經(jīng)典液相色譜儀為基礎(chǔ)，引入氣相色譜儀的理論和實(shí)驗(yàn)方法，將流動(dòng)相改為高壓輸送，采用高效固定相和在線檢測等手段，發(fā)展而成的分離分析技術(shù)，具有高壓、高速、高效、高靈敏度、高選擇性和應(yīng)用范圍廣等特點(diǎn)，成為生物制藥領(lǐng)域發(fā)展快、應(yīng)用廣的現(xiàn)代分析技術(shù)之一。

二、高效液相色譜儀在檢測藥含量方面的應(yīng)用：

藥與人類的健康、生活質(zhì)量的提高關(guān)系極大，許多藥品由于受到純度的影響，效果不能充分發(fā)揮，甚至產(chǎn)生毒副作用；有時(shí)服用前需作各種試驗(yàn)，帶來很多麻煩，高效液相色譜儀的檢測就比較簡單，是分離與純化藥的較佳選擇。由于高效液相色譜儀具有靈敏度高、快速簡便和專一性的特點(diǎn)，廣泛應(yīng)用于藥分析，特別在干擾較多的時(shí)候表現(xiàn)得比其它方法好。

三、高效液相色譜儀在檢測制藥廢水中的應(yīng)用：

制藥廢水中的殘留藥成分對環(huán)境造成的污染越來越嚴(yán)重, 制藥廢水的治理已成為環(huán)境保護(hù)工作中相當(dāng)重要的方面。

高效液相色譜儀流動(dòng)相(MOBLLE PHASE)的問題

1、流動(dòng)相的過濾。

配制好的流動(dòng)相在使用前一定要先用0.5um孔徑的微孔濾膜來過濾。這是因?yàn)槿芤褐泻泻芏嗳庋垭y以發(fā)現(xiàn)的微小顆粒，如果不把它們?yōu)V除掉，就會(huì)堵塞泵口、柱頭上的過濾器，這樣就堵塞了流動(dòng)相的正常通道，使色譜柱的阻力增加，柱壓升高，柱效下降。碰到這種情況時(shí)，要換用經(jīng)過濾的流動(dòng)相，并將堵塞的濾器拆下來浸泡在20%的硝酸水溶液中以超聲波清洗機(jī)清洗20分鐘，以除去濾片上的堵塞物。

2、流動(dòng)相的脫氣。

流動(dòng)相在使用前必須脫氣，以盡可能的除去溶解在流動(dòng)相中的氣體，否則，這些氣體會(huì)使柱填料的性能降低，還能夠?qū)z測器的信號產(chǎn)生很大的干擾。脫氣有多種方法，如超聲脫氣、真空脫氣、氮?dú)饷摎獾取Ｕ婵彰摎夥ê偷獨(dú)饬髅摎夥ㄊ悄壳俺Ｓ玫拿摎夥?。水和甲醇混合后?huì)產(chǎn)生大量的氣泡，如果不脫氣就使用，氣泡就會(huì)進(jìn)入色譜柱和檢測器，并將影響分析工作的正常進(jìn)行。