親和柱——原理介紹

親和柱的功能基于抗原與間可逆的特異性結合反應，使其可從復雜樣品基質中特異性地回收目標化合物。上樣后，柱中以共價鍵形式偶聯在凝膠上的會與抗原（即目標化合物）特異性結合，雜質不會被結合，大部分隨樣品溶液流出小柱。通過淋洗的方式除去小柱內剩余雜質后，使用其他洗脫液（根據對應產品說明書選擇）進行洗脫即可得到潔凈的目標化合物溶液，可直接用于后續(xù)檢測。

親和柱——親和層析的原理

通常，在開始親和層析前需要預先進行全細胞提取物的粗制，例如細胞裂解液，生長培養(yǎng)基。

首先將固定相裝入帶有流動相的色譜柱中，其中含有某類特定的生物大分子（從DNA到蛋白質，取決于實驗需求）。等待一段時間使兩相充分混合，隨后將洗滌緩沖液倒入色譜柱中。洗滌緩沖液通過破壞非目標生物分子與固定相的較弱結合來去除非目標生物分子。目標生物分子對固定相具有較高的親和力，因此能夠保持與固定相的結合，而不會被洗滌緩沖液沖走。然后將洗脫緩沖液倒入含有剩余目標生物分子的色譜柱中。洗脫緩沖液比洗滌緩沖液，能夠從更大程度上減弱靶生物分子與固定相之間的相互作用，從而洗脫靶生物分子。洗脫得到的溶液包含洗脫緩沖液和目標分子，稱為洗脫液。

固定相一般是凝膠基質，常見的有瓊脂糖。為了防止目標分子與配體結合過程中的空間干擾或重疊，首先將含有烴鏈的抑制連接到瓊脂糖珠（固體支持物）上。這種具有烴鏈的抑制通常被稱為瓊脂糖珠和靶分子之間的間隔基。