ELISA 是一種結(jié)合抗原、抗ti特異性反應(yīng)和酶對(duì)底物高xiao催化作用的高敏感性免yi學(xué)實(shí)驗(yàn)技術(shù)。ELISA 的基礎(chǔ)是抗原或抗ti的固相化及抗原或抗ti的酶標(biāo)記。結(jié)合在固相載體表面的抗原或抗ti仍保持其免yi學(xué)活性，酶標(biāo)記的抗原或抗ti既保留其免yi學(xué)活性，又保留酶的活性。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應(yīng)，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗ti，通過(guò)反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。二、大腸菌群檢驗(yàn)方法:由于大腸菌群指的是具有某些特性的一組與糞便污染有關(guān)的細(xì)菌，即:需氧及兼性厭氧、在37°C能分解乳糖產(chǎn)酸產(chǎn)氣的革蘭氏陰性無(wú)芽胞。此時(shí)固相上的酶含量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量呈一定的比例。加入酶反應(yīng)的底物，底物被酶催化成為有色產(chǎn)物，產(chǎn)物的量與標(biāo)本中受檢物質(zhì)的量直接相關(guān)，故可根據(jù)呈色的深淺進(jìn)行定性或定量分析。

基因組甲l基化水平(Methyl ati on Content)的分析:

1.高l效液相色譜(Hi gh-performanceLi qui dChromatography, HPLC)HPLC是- -種比較傳統(tǒng)的方法,是根據(jù)DNA或蛋白分子量和構(gòu)象的不同而使其加以分離。由于在動(dòng)態(tài)相和靜態(tài)相下分子的光吸收度并不相同而加以定量。隨著系統(tǒng)的壓強(qiáng)的增加，其分辨率增l高。故而能夠定量測(cè)定基因組整體水平DNA甲l基化水平。C使用Imageproplus軟件對(duì)A蛋白灰度檢測(cè)，A蛋白表達(dá)變化統(tǒng)計(jì)圖。該方法由Ruo等1980年首l次報(bào)道。過(guò)程是將DNA樣品先經(jīng)鹽酸或氫l氟酸水解成堿基，水解產(chǎn)物通過(guò)色譜柱，結(jié)果與標(biāo)準(zhǔn)品比較，用紫外光測(cè)定吸收峰值及其量，計(jì)算5 mC/(5mC 5C)的積分面積就得到基因組整體的甲l基化水平。這是一種檢測(cè)DNA甲l基化水平的標(biāo)準(zhǔn)方法。

2.高l效毛細(xì)管電泳法(Hi gh-per formance Capillary Electrophoresis, HPCE)這是一-種利用窄孔熔融石英毛細(xì)管來(lái)從復(fù)合物中分離不同化學(xué)組分的技術(shù)。其基礎(chǔ)是在強(qiáng)電場(chǎng)下不同分子的由于其所帶電荷，大小，結(jié)構(gòu)以及疏水性等不同而相互分開。ceRNA是目前轉(zhuǎn)錄調(diào)控領(lǐng)域的熱點(diǎn)內(nèi)容之一，通過(guò)全轉(zhuǎn)錄組研究能夠系統(tǒng)性的闡述ceRNA的分子作用機(jī)制。用HIPCE方法處理DNA水解產(chǎn)物來(lái)確定5mC水平，簡(jiǎn)便，經(jīng)濟(jì)且敏感性高。

Southern雜交

實(shí)驗(yàn)原理

      Southern印跡雜交（Southern blot）是1975年由英國(guó)人southern創(chuàng)建，是研究DNA圖譜的基本技術(shù)。Southern印跡雜交是進(jìn)行基因組DNA特定序列定位的通用方法。在測(cè)定時(shí)，受檢標(biāo)本(測(cè)定其中的抗ti或抗原)與固相載體表面的抗原或抗ti起反應(yīng)，洗滌使固相載體上形成的抗原抗ti復(fù)合物與液體中的其他物質(zhì)分開，再加入酶標(biāo)記的抗原或抗ti，通過(guò)反應(yīng)使其結(jié)合在固相載體上。一般利用瓊脂糖凝膠電泳分離經(jīng)限制性內(nèi)切酶消化的DNAl片段，將膠上的DNA變性并在原位將單鏈DNAl片段轉(zhuǎn)移至尼龍膜或其他固相支持物上，經(jīng)干烤或者紫外線照射固定，再與相對(duì)應(yīng)結(jié)構(gòu)的標(biāo)記探針進(jìn)行雜交，用放l射自顯影或酶反應(yīng)顯色，從而檢測(cè)特定DNA分子的含量。