【廣告】
Tris-HCl試劑桶裝。Tris、Tris鹽酸鹽、Tris-HCl緩沖溶液即用型pH值區(qū)別:1、Tris或Tris堿pH值為10-12,呈弱堿性;2、Tris鹽酸鹽pH值為4-6,呈弱酸性(有些產(chǎn)品為Tris與其鹽酸鹽的混合粉末,pH會(huì)有所上升);3、Tris-HCl緩沖溶液通常是按一定的Tris與HCl比例配置好的即用型緩沖溶液,pH值取決于兩者比例,常用的有7.4,7.6,8.0,8.8等,一般呈近中性,偏弱堿性。
使用緩沖溶液的注意事項(xiàng):不少緩沖溶液都含有易揮發(fā)組分,如,氨-氯化銨中的氨酷酸-中的醋酸。現(xiàn)在,不少實(shí)驗(yàn)室引入了定量加液器,用定量加液器加試劑,具有簡(jiǎn)便準(zhǔn)確誤差恒定的特點(diǎn),特別是在做成批樣品時(shí)更顯出它的優(yōu)越性,不少同志也喜歡用它來加緩沖液,但是,應(yīng)注意緩沖液不能長(zhǎng)久存放在定量加液器中,因該器皿不密閉,易造成氨的揮發(fā)(醋酸-緩沖液中的醋酸也同理),從而,導(dǎo)致溶液失效,正確的做法是緩沖液應(yīng)適量配制,使用后及時(shí)密閉并置于低溫中保存。
TBST緩沖液 TBST中含有Tris-HCl,NaCl,tween20這三種物質(zhì),是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液。目的是洗掉非特異性吸附的蛋白質(zhì),并且維持一個(gè)接近的天然環(huán)境。其中,Tween是一種離子表面活性劑,可加速非特異性結(jié)合的分離。因?yàn)閃estern Blotting中所用的膜可以與蛋白質(zhì)結(jié)合,孵育過程中,能夠與膜非特異性結(jié)合。為了防止以后曝光造成膠片背景太高,在孵育后,混有Tween 20的TBS 能夠?qū)⒎翘禺愋越Y(jié)合的洗掉,增加特異性。
20mg/ml蛋白酶K(proteinase K):將200mg的蛋白酶L加入到9.5ml水中,輕輕搖動(dòng),直至蛋白酶K完全溶解。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
10mg/mlRnase(無DNase)(DNase-free RNase):溶解10mg的胰蛋白R(shí)NA酶于1ml的10mmol/L的乙酸鈉水溶液中(pH 5.0)。溶解后于水浴中煮沸15min,使DNA酶失活。用1mol/L的Tris-HCl調(diào)pH至7.5,于-20℃貯存。(配制過程中要戴手套)