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拉曼光譜技術(shù)的優(yōu)越性
提供快速、簡單、可重復(fù)、且更重要的是無損傷的定性定量分析,它無需樣品準(zhǔn)備,樣品可直接通過光纖探頭或者通過玻璃、石英、和光纖測量,此外。。。
①由于水的拉曼散射很微弱,拉曼光譜是研究水溶液中的生物樣品和化學(xué)化合物的理想工具。
②拉曼一次可以同時(shí)覆蓋50~4000波數(shù)的區(qū)間,可對(duì)有機(jī)物及無機(jī)物進(jìn)行分析。相反,若讓紅外光譜覆蓋相同的區(qū)間則必須改變光柵、光束分離器、濾波器和檢測器。。。
③拉曼光譜譜峰清晰尖銳,更適合定量研究、數(shù)據(jù)庫搜索、以及運(yùn)用差異分析進(jìn)行定性研究。在化學(xué)結(jié)構(gòu)分析中,獨(dú)立的拉曼區(qū)間的強(qiáng)度可以和功能集團(tuán)的數(shù)量相關(guān)。
④因?yàn)榧す馐闹睆皆谒木劢共课煌ǔV挥?.2~2毫米,常規(guī)拉曼光譜只需要少量的樣品就可以得到。這是拉曼光譜相對(duì)常規(guī)紅外光譜一個(gè)很大的優(yōu)勢(shì),而且拉曼顯微鏡物鏡可將激光束進(jìn)一步聚焦至20微米甚至更小,可分析更小面積的樣品。
⑤共振拉曼效應(yīng)可以用來有選擇性地增強(qiáng)大生物分子特個(gè)發(fā)色基團(tuán)的振動(dòng),這些發(fā)色基團(tuán)的拉曼光強(qiáng)能被選擇性地增強(qiáng)1000到10000倍。
便攜式拉曼光譜儀關(guān)鍵部件
一臺(tái)完整的拉曼光譜儀通常由激光器(光源)、樣品外光路、色散系統(tǒng)、信號(hào)接收系統(tǒng)和信息處理系統(tǒng)幾大部分組成。相對(duì)于好的實(shí)驗(yàn)室系統(tǒng),便攜式拉曼設(shè)備的內(nèi)部部件更簡單且模塊化程度更高,其關(guān)鍵的零部件包括光源模塊、光譜儀模塊以及拉曼探頭三樣。國產(chǎn)拉曼采用的光譜儀相較進(jìn)口產(chǎn)品存在一定差距,主要體現(xiàn)在光譜分辨率、噪聲控制等方面。在激光光源模塊領(lǐng)域,國內(nèi)外拉曼大部分選用的激光器在體積和能量方面基本一致,主要在線寬和輸出穩(wěn)定方面存在差異。但僅針對(duì)便攜式拉曼設(shè)備的應(yīng)用來說,以上幾個(gè)關(guān)鍵部件國內(nèi)外廠商的技術(shù)水平相差已經(jīng)不大,國產(chǎn)產(chǎn)品正在靠近國外同類產(chǎn)品的水平。
為什么測試時(shí)一些光譜給出十分強(qiáng)的背景信號(hào),而這些信號(hào)湮蓋了拉曼信號(hào)?
一些發(fā)熒光或磷光的樣品在測量時(shí)會(huì)給出非常高的背景光譜。令人遺憾的是這些是樣品材料的本征性質(zhì),是激光輻照下無法避免的結(jié)果,而且通常情況下熒光比拉曼信號(hào)更強(qiáng)。盡管這樣,我們?nèi)钥刹扇∫恍┐胧p少或減輕熒光副作用。
猝滅:一些樣品可采用測試前將激光輻照在表面一段時(shí)間對(duì)熒光進(jìn)行猝滅以減小熒光光譜的背景增強(qiáng)拉曼信號(hào)。猝滅的時(shí)間根據(jù)樣品不同可從幾分鐘到幾小時(shí)。值得注意的是:猝滅效應(yīng)是呈指數(shù)衰減的,一開始就可觀察到。
共焦模式:采用共焦模式測量強(qiáng)光下輻照的小體積樣品時(shí)熒光將會(huì)大大降低。該法也同樣適合有熒光襯底的樣品,例如被熒光物質(zhì)基體包裹的樣品。
改變激發(fā)激光的波長:有時(shí)改變波長是僅有可行的避免熒光干擾的方法。
如果拉曼實(shí)驗(yàn)室里有太多的室內(nèi)光源比如熒光、白熾燈或日光燈等,這會(huì)在測試光譜上出現(xiàn)不必要的背景信號(hào)。因此在測試的時(shí)候應(yīng)將室內(nèi)光關(guān)閉或降到很小或用遮光罩將樣品臺(tái)罩住以避免外界的雜散光進(jìn)入光譜儀。