將細胞凍存管由液態(tài)氮中取出，置于室溫回溫，不用水浴溶解。此時可準備新鮮培養(yǎng)   基、無菌15ml離心管、培養(yǎng)瓶。在生物安全柜內，直接以少量培養(yǎng)基反復沖融，使細胞團塊化凍。 先在無菌15ml離心管中加入5ml培養(yǎng)基，再將化凍的細胞懸液加入離心管中。以200~300g，3分鐘離心收集細胞。 倒去上清液，重懸細胞，移到培養(yǎng)瓶中培養(yǎng)。

細胞培養(yǎng)時可能導致衰老的原因：1.細胞傳代次數(shù)比較多，一定要控制細胞傳代次數(shù)！大量擴增細胞，將細胞進行凍存，在必要的時候重新復蘇。2.胰酶消化時間太長，胰酶消化時間過長容易導致細胞狀態(tài)不佳以及胞質疏松;細胞傳代時需要留意胰酶消化的時間。消化過度，在消化細胞時會對細胞的表面蛋白有較強的損傷，所以消化的時間不能過長，建議使用合適濃度和pH值的消化酶，否則會導致細胞衰老和分化。

細胞質不是凝固靜止的，而是緩緩地運動著的。在只具有一個中央液泡的細胞內，細胞質往往圍繞液泡循環(huán)流動，這樣便促進了細胞內物質的轉運，也加強了細胞器之間的相互聯(lián)系。細胞質運動是一種消耗能量的生命現(xiàn)象。細胞的生命活動越旺盛，細胞質流動越快，反之，則越慢。細胞死后，其細胞質的流動也就停止了。細胞中還有一些細胞器，它們具有不同的結構，執(zhí)行著不同的功能，共同完成細胞的生命活動。這些細胞器的結構需用電子顯微鏡觀察。在電鏡下觀察到的細胞結構稱為亞顯微結構。