分光光度計(jì)的工作原理

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分光光度計(jì)采用一個(gè)可以產(chǎn)生多個(gè)波長(zhǎng)的光源，通過(guò)系列分光裝置，從而產(chǎn)生特定波長(zhǎng)的光源，光線透過(guò)測(cè)試的樣品后，部分光線被吸收，計(jì)算樣品的吸光值，從而轉(zhuǎn)化成樣品的濃度。樣品的吸光值與樣品的濃度成正比。

單色光輻射穿過(guò)被測(cè)物質(zhì)溶液時(shí)，被該物質(zhì)吸收的量與該物質(zhì)的濃度和液層的厚度（光路長(zhǎng)度）成正比，其關(guān)系如下式：

A=-lg(I/I0)=-lgT=kLc

式中 :A 為吸光度；

I0為入射的單色光強(qiáng)度；

I 為透射的單色光強(qiáng)度；

T 為物質(zhì)的透射率；

k 為摩爾吸收系數(shù)；

L 為被分析物質(zhì)的光程，即比色皿的邊長(zhǎng)；

c 為物質(zhì)的濃度；

分光光度計(jì)的應(yīng)用范圍

超微量紫外可見分光光度計(jì)是一類很重要的分析儀器，無(wú)論在物理學(xué)、化學(xué)、生物學(xué)、醫(yī)學(xué)、材料學(xué)、環(huán)境科學(xué)等科學(xué)研究領(lǐng)域，還是在化工、環(huán)境檢測(cè)、冶金等現(xiàn)代生產(chǎn)與管理部門，超微量紫外可見分光光度計(jì)都有廣泛而重要的應(yīng)用。超微量紫外可見分光光度計(jì)就是利用分光光度法對(duì)物質(zhì)進(jìn)行定量定性分析，常用于核酸，蛋白定量及細(xì)胞培養(yǎng)檢測(cè)；超微量紫外可見分光光度計(jì)已經(jīng)是現(xiàn)代分子生物實(shí)驗(yàn)室常規(guī)儀器。

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分光光度計(jì)的關(guān)鍵參數(shù)有哪些

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選擇可見和紫外可見的分光光度計(jì)所關(guān)注的*關(guān)鍵的指標(biāo)有三點(diǎn)：一是波長(zhǎng)范圍，二是波長(zhǎng)準(zhǔn)確度，三是雜散光參數(shù)。波長(zhǎng)范圍的選擇是由用戶實(shí)驗(yàn)需要所定，波長(zhǎng)范圍越寬的價(jià)格越貴;波長(zhǎng)準(zhǔn)確度及雜散光參數(shù)的數(shù)值越低，表示性能越好。

影響顯色反應(yīng)的主要因素

(1)顯色劑用量：通過(guò)實(shí)驗(yàn)來(lái)確定*適用量；

(2)反應(yīng)液的酸堿度(pH)溶液酸堿度直接影響金屬離子與顯色劑存在形式以及有色化合物組成的穩(wěn)定性；

(3)反應(yīng)溫度：不同的顯色反應(yīng)需要不同的反應(yīng)溫度，一般顯色反應(yīng)可在室溫下完成；

(4)顯色反應(yīng)時(shí)間：顯色反應(yīng)的速度有快有慢；

(5)干擾離子的影響：應(yīng)采用適當(dāng)方法消除其影響；