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PCR儀
簡單的說,PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成,基本上它是利用DNA聚合酶進行專一性的連鎖拷貝。目前常用的技術(shù),可以將一段基因拷貝為原來的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴增的目的和檢測的標準,可以將PCR儀分為普通PCR儀,梯度PCR儀,原位PCR儀,實時熒光定量PCR儀四類。
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PCR儀基本要素
基本的PCR須具備
1.要被拷貝的DNA模板 Template
2.界定拷貝范圍兩端的引物Primers.
3.DNA聚合酶Taq. Polymearse
4.合成的原料(四種脫氧核苷酸)及水。
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PCR儀的改進與完善
Mullis起初使用的DNA聚合酶是 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段,1988年初,Keohanog改用T4 DNA聚合酶進行PCR,其擴增的DNA片段很均一,真實性也較高,只有所期望的一種DNA片段。但每循環(huán)一次,仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜thermus aquaticus 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。
此酶具有以下特點:
①耐高溫,在70℃下反應(yīng)2h后其殘留活性大于原來的90%,在93℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的60%,在95℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的40%。
②在熱變性時不會被鈍化,不必在每次擴增反應(yīng)后再加新酶。
③大大提高了擴增片段特異性和擴增效率,增加了擴增長度2.0Kb。由于提高了擴增的特異性和效率,因而其靈敏性也大大提高。為與大腸多聚酶IKlenow片段區(qū)別,將此酶命名為TaqDNA多聚酶Taq DNAPolymerase。此酶的發(fā)現(xiàn)使PCR廣泛的被應(yīng)用。
PCR技術(shù)
PCR技術(shù)神奇就神奇在以下幾個特點上:一是被擴增的DNA所需量特別小,理論上講一個分子就可以用于擴增了;二是擴增,目的基因的量成指數(shù)形式擴增,幾個小時就擴增1000萬倍以上?,F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于生命科學研究、食品衛(wèi)生、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測等諸多方面,真不愧是“獲得諾貝爾獎”的好技術(shù)!