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工業(yè)合成:三羥本身由于結(jié)構(gòu)簡單,以中心碳原子呈四面體結(jié)構(gòu),含三個羥和一個氨基,可以進行多種取代和氧化還原反應(yīng),是一種化工合成原料。緩沖劑TAPS的一種合成方法就是利用Tris和1,3-丙磺酸內(nèi)酯在醇中合成的。通常要采購用于工業(yè)合成的Tris原料對試劑純度要求不高,重點是量大,找產(chǎn)能較大的原料生產(chǎn)廠家是比較劃算的。
Tris-HCl緩沖液的缺點:1、緩沖液的pH值受溶液濃度影響較大,緩沖液稀釋十倍,pH值的變化大于0.1;2、溫度效應(yīng)大,溫度變化對緩沖液pH值的影響很大,即:△pKa/℃=-0.031 ,例如:4℃時緩沖液的pH=8.4,則37℃時的pH=7.4,所以一定要在使用溫度下進行配制,室溫下配制的Tris-HCl緩沖液不能用于0℃~4℃。3、易吸收空氣中的CO2,所以配制的緩沖液要蓋嚴密封。
后,可以通過添加一些穩(wěn)定劑到蛋白純化緩沖液中,以幫助提高蛋白純化時的溶解度和穩(wěn)定性。在緩沖液中添加惰性蛋白BSA某種程度可以穩(wěn)定蛋白,但必須確保這些加入的穩(wěn)定蛋白不干擾實驗。有時添加甘油、聚乙二醇等添加劑可以增加緩沖液粘度,有助于防止蛋白聚集。另外,使用少量的表面活性劑和一些離子化合物如硫酸鹽、氨基酸、檸檬酸等可以屏蔽蛋白間的離子相互作用,幫助蛋白溶解。
5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。
10N(NaOH):溶解400g顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。