實(shí)驗(yàn)步驟

1、實(shí)驗(yàn)之前，一定要確保高架十字迷宮整個(gè)裝置的清潔。這個(gè)步驟不僅僅是要求當(dāng)天的實(shí)驗(yàn)，更加側(cè)重于每一次動(dòng)物實(shí)驗(yàn)完成后的清潔除味工作，一定要去除上一只動(dòng)物在宮體內(nèi)遺留下來的尿液、糞便等，盡可能創(chuàng)造一個(gè)清潔、無味道的理想試驗(yàn)環(huán)境。同時(shí)，實(shí)驗(yàn)員需要記錄動(dòng)物的編號、日期、狀態(tài)等信息；實(shí)驗(yàn)動(dòng)物提前運(yùn)送到行為學(xué)實(shí)驗(yàn)室臨時(shí)籠架 ,

適應(yīng)環(huán)境至少3H左右, 減少動(dòng)物緊張。

2、將實(shí)驗(yàn)動(dòng)物（大鼠或者小鼠）從飼養(yǎng)籠中取出，實(shí)驗(yàn)動(dòng)物盡量背向?qū)嶒?yàn)員，將動(dòng)物輕輕放在儀器宮體的中央?yún)^(qū)域，動(dòng)物面向開臂，然后實(shí)驗(yàn)員迅速安靜的離開；

3、打開SuperMaze或者VisuTrack動(dòng)物行為分析軟件，跟蹤動(dòng)物在高架十字迷宮儀器內(nèi)的軌跡運(yùn)動(dòng)，自動(dòng)計(jì)算指標(biāo)，通常實(shí)驗(yàn)時(shí)長為5min；

4、實(shí)驗(yàn)結(jié)束后，取出實(shí)驗(yàn)動(dòng)物，放入飼養(yǎng)籠，做好實(shí)驗(yàn)完成動(dòng)物的標(biāo)記信息，同時(shí)，用酒精和紙巾清潔迷宮。

注意事項(xiàng)

1. 針頭大小與動(dòng)物的種類有關(guān)，t 同時(shí)針頭一定要磨鈍。

2. 檢查灌注泵的運(yùn)作情況，一定排出管子的氣泡和空氣，防止空氣栓塞。

3. 經(jīng)腹腔暴腔，先清楚升主動(dòng)脈外面的脂肪組織和心外膜組織。

4. 將針頭經(jīng)左心室插入升主動(dòng)脈（顏色變白的哦），并用鉗子固定。

5. 解開右心耳，同時(shí)開啟灌注泵。注意，不要隨便揭開心臟的其他部位，否則有時(shí)候可能會灌注成功但是絕大部分會造成灌注不成功，尤其。

6. 將 4 度的生理鹽水（好已動(dòng)物的發(fā)白為標(biāo)準(zhǔn)，我們實(shí)驗(yàn)室的大鼠約用 250ml）和多聚甲醛 (根據(jù)所取得材料而定) 依次灌入。

7. 整個(gè)過程均應(yīng)將動(dòng)物放在冰上，以便于更好地保存目的蛋白和酶的活性。

2.2旋轉(zhuǎn)圓筒睡眠剝奪法

此方法于 1979 年先應(yīng)用于睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)中，設(shè)備主要由一柱形圓筒及一小型慢速馬達(dá)構(gòu)成。圓筒直徑 30 cm，高 30 cm 。圓筒底由 PVC (聚)構(gòu)成，側(cè)壁由直徑為 10.4 m m 的 PVC 桿圍成。桿長度 30 cm，桿之間間隔 15.5 m m，圓筒與小型馬達(dá)相連。馬達(dá)轉(zhuǎn)速為每 45 s轉(zhuǎn) 1 圈(也有學(xué)者應(yīng)用每 m in 轉(zhuǎn) 1 圈)。至少在實(shí)驗(yàn)前 2 d每天將大鼠放入圓筒中適應(yīng)環(huán)境 1 次，適應(yīng)時(shí)間不少于 3 h。實(shí)驗(yàn)時(shí)將馬達(dá)按 45 s每1 圈進(jìn)行勻速轉(zhuǎn)動(dòng)，通過圓筒的轉(zhuǎn)動(dòng)帶動(dòng)大鼠不停運(yùn)動(dòng)而達(dá)到睡眠剝奪的目的。此類方法簡單易行，睡眠剝奪效果明顯。缺點(diǎn)是長時(shí)間不停運(yùn)動(dòng)可引起機(jī)體的運(yùn)動(dòng)后應(yīng)激反應(yīng)及身體疲勞，可能干擾睡眠剝奪實(shí)驗(yàn)結(jié)果! 此類方法發(fā)展出多種變化，有實(shí)驗(yàn)者在進(jìn)行新生大鼠睡眠剝奪時(shí)將筒旋轉(zhuǎn)速調(diào)節(jié)至 2~3 r/m in后期逐漸增加至 6~7 r/m in。