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全自動(dòng)核酸提取儀概述
全自動(dòng)核酸提取儀是一種用于預(yù)防醫(yī)學(xué)與公共衛(wèi)生學(xué)領(lǐng)域的醫(yī)學(xué)科研儀器,于2016年11月15日啟用。
純化原理:硅膠膜吸附,真空抽濾法;上樣體積:10-500微升,可調(diào)節(jié);洗脫體積:30-600微升,可調(diào)節(jié)。
主要功能:從血液、動(dòng)植物組織、干血片、小鼠尾巴等樣本中全自動(dòng)純化基因組DNA;從血漿、拭子、鼻咽分泌物等樣本中全自動(dòng)純化病毒總核酸。
全自動(dòng)核酸提取儀介紹
全自動(dòng)核酸提取儀,是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)自動(dòng)完成樣本核酸的提取工作的儀器,核酸提取儀分為兩類:一類是大型的自動(dòng)化的,一般稱為自動(dòng)液體工作站;另一類是小型自動(dòng)核酸提取儀,利用封裝好的配套試劑自動(dòng)完成提取純化過(guò)程。大型自動(dòng)液體工作站因?yàn)樵O(shè)備成本高昂,運(yùn)行成本高,適合一次提取幾千個(gè)同一種類標(biāo)本,所以真正得到應(yīng)用的比較少;而小型自動(dòng)化的儀器,因?yàn)閮x器設(shè)備和運(yùn)行成本低,操作方便 得到越來(lái)越多的應(yīng)用。
全自動(dòng)核酸提取儀簡(jiǎn)介
核酸提取儀是應(yīng)用配套的核酸提取試劑來(lái)自動(dòng)完成樣本核酸的提取工作的儀器。它可替代原來(lái)復(fù)雜的手動(dòng)操作,儀器自動(dòng)完成對(duì)細(xì)胞或組織的處理,分析提取出目標(biāo)DNA/RNA。
目前市場(chǎng)上的核酸提取儀的提取原理主要分為兩種:磁珠法和膜吸附法,其中磁珠法占市場(chǎng)主流地位。
磁珠法提取核酸是通過(guò)細(xì)胞裂解液裂解細(xì)胞,從細(xì)胞中游離出來(lái)的核酸分子被特異的吸附到磁性顆粒表面,而蛋白質(zhì)等雜質(zhì)不被吸附而留在溶液中。反應(yīng)一定時(shí)間之后,再在磁場(chǎng)作用下,使磁性顆粒與液體分開(kāi),回收顆粒(即磁珠-DNA 混合物),再用洗脫液洗脫即可以得到純凈的DNA。
全自動(dòng)核酸提取儀——類型介紹
磁珠法自動(dòng)核酸提取儀又分為磁棒法和抽吸法
先說(shuō)抽吸法:顧名思義,抽吸法就是通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)進(jìn)行,通過(guò)自動(dòng)移液裝置來(lái)加入裂解液、磁珠吸附;抽走裂解液,加入漂洗液,磁珠吸附,抽走漂洗液,加入洗脫緩沖液。從步驟上好像沒(méi)什么問(wèn)題,但是抽吸法的問(wèn)題在于,為了在去除廢液的時(shí)候不抽走磁珠,移液器不能靠磁珠太近,以防磁珠連同廢液被抽掉,這樣每一次抽廢液的時(shí)候總有一小部分不能完全的抽走,特別是磁鐵在底部的裝置,因?yàn)榇胖楸淮盆F吸附在底部,所以移液器不能靠底部太近,這樣漂洗液就不能完全去除,殘留的漂洗液中的鹽和乙醇會(huì)影響后面的洗脫效率和PCR成功率;磁鐵在側(cè)面的裝置殘留的液體會(huì)少些,但是洗脫的效率也不好,依靠DNA自行溶解到洗脫緩沖液中,除非等上半小時(shí)以上,所以有些96自動(dòng)核酸提取工作站,提取一輪的時(shí)間需要150分鐘,32磁棒法的同樣的時(shí)間可以提5輪了。
再說(shuō)磁棒法核酸提取儀:通量通常有8、16、32、96通道,相對(duì)于抽吸法,磁棒法的優(yōu)點(diǎn)是每一步的液體不殘留,因?yàn)榇虐糁粠ё叽胖?,轉(zhuǎn)移到下一個(gè)步驟相應(yīng)的反應(yīng)孔中,另外選擇磁棒法的提取儀器盡量要功能更齊全的,比如可以加熱,每個(gè)加熱槽獨(dú)立溫控,這樣可以設(shè)置加熱、裂解、洗脫的不同溫度,另外很重要的一點(diǎn)是,帶動(dòng)磁棒的電機(jī)要能帶動(dòng)磁棒進(jìn)行液體的快速混勻和攪拌,這樣才有利于自動(dòng)化和有助于裂解和漂洗。磁棒法的通量選擇盡量是32通道,96通道的看似通量更高,但是有個(gè)很現(xiàn)實(shí)的問(wèn)題,96個(gè)磁力棒在從一個(gè)板轉(zhuǎn)移至另外一個(gè)板的時(shí)候,磁力棒上面的液體中途滴下來(lái)怎么辦,它會(huì)滴到別的孔中造成污染,而32通道的磁力棒運(yùn)行軌跡不經(jīng)過(guò)其他樣本的上空,這樣不會(huì)交叉污染。