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Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質晶體生長。Tris緩沖液的低離子強度特點可用于線蟲核纖層蛋白的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質電泳緩沖液的主要成分之一,其在電泳緩沖液中與甘氨酸構成緩沖體系,穩(wěn)定電泳過程中的PH。Tris還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些的中間物。Tris也被用作滴定標準物。 作為蛋白緩沖液時,若后續(xù)工作需要質譜,則不適宜用Tris,換成其他質譜儀可耐受的緩沖液。
提到緩沖液就不得不延伸一下,這就是Henderson-Hasselbalch方程。
在前面提到,
將等式同時取對數,并簡化就可以得到:
或者
這就是Henderson-Hasselbalch方程。
注意:式子中酸及其共軛堿的濃度都是平衡時的濃度,除了酸性過于強的情況下,由于同離子效應的存在,一般都可用此式計算。
此外,一些緩沖體系對溫度非常敏感,例如Tris-HCl緩沖液,如果你在25℃時將緩沖體系調至pH值8,pH值將在5℃時增加到8.58而在37℃時降到7.71。所以,如果打算在4℃條件下保存蛋白或在37℃進行實驗,就應該考慮到室溫下調的pH值可能在實驗條件中就不適用了。 其他類型的色譜分離柱,如凝膠過濾柱和Ni2 親和層析柱,可能需要更高的鹽濃度。我一般用高達500 mM NaCl進行高鹽淋洗,以防止蛋白和柱之間的非特異性結合。