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生物緩沖劑Tris被人熟知的應(yīng)用,就是用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑以及生物緩沖劑。Tris-HCl,NaCl,tween20這三種物質(zhì)可組成TBST緩沖液,是做Western Blotting中常用的一種洗膜緩沖液;Tris-HCl中加入EDTA可制成TE緩沖液,可用于DNA的穩(wěn)定和存儲(chǔ);將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成,可獲得TAE緩沖液,換成硼酸可獲得TBE緩沖液,這兩種緩沖液常用于核酸電泳實(shí)驗(yàn)中。
Tris-HCl試劑桶裝。Tris、Tris鹽酸鹽、Tris-HCl緩沖溶液即用型pH值區(qū)別:1、Tris或Tris堿pH值為10-12,呈弱堿性;2、Tris鹽酸鹽pH值為4-6,呈弱酸性(有些產(chǎn)品為Tris與其鹽酸鹽的混合粉末,pH會(huì)有所上升);3、Tris-HCl緩沖溶液通常是按一定的Tris與HCl比例配置好的即用型緩沖溶液,pH值取決于兩者比例,常用的有7.4,7.6,8.0,8.8等,一般呈近中性,偏弱堿性。
TE緩沖液 Tris鹽酸緩沖液中加入EDTA制成“TE緩沖液”,TE緩沖液是弱堿性,對(duì)DNA的堿基有保護(hù)性,因此,DNA在TE中的穩(wěn)定性較好,不易被破壞完整性或產(chǎn)生開環(huán)及斷裂,TE緩沖液被用于DNA的穩(wěn)定和儲(chǔ)存。
將調(diào)節(jié)pH值的酸溶液換成,則獲得“TAE緩沖液”(Tris/Acetate/EDTA),TAE是使用廣泛的緩沖系統(tǒng)。其特點(diǎn)是超螺旋在其中電泳時(shí)更符合實(shí)際相對(duì)分子質(zhì)量,且雙鏈線狀DNA在其中的遷移率也較快,電泳大于13kb的片段時(shí)用TAE緩沖液將取得更好的分離效果。