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三羥Tris是生物化學(xué)領(lǐng)域應(yīng)用很廣泛的一種緩沖劑,cas號(hào)77-86-1,具有性質(zhì)穩(wěn)定不參與生化過(guò)程、緩沖能力強(qiáng)等優(yōu)點(diǎn),被廣泛用于蛋白質(zhì)和核酸相關(guān)的檢驗(yàn)。由于Tris的用量很大很廣泛,一些細(xì)節(jié)也需要注意,Tris緩沖液雖然緩沖能力強(qiáng),但稀釋過(guò)大或者反應(yīng)體系體積變化大的時(shí)候,需要慎重使用Tris,稀釋十倍的話篇pH變化大于0.1,磷酸鹽緩沖液則pH變化小于0.1。
10mg/ml牛蛋白(BSA):加100mg的牛蛋白(組分V或分子生物學(xué)試劑級(jí),無(wú)DNA酶)于9.5ml水中(為減少變性,
須將蛋白加入水中,而不是將水加入蛋白),蓋好蓋后,輕輕搖動(dòng),直至牛蛋白完全溶解為止。不要渦旋混合。加水定容到10ml,然后分裝成小份貯存于-20℃。
1mol/L二硫蘇糖醇(DTT):在二硫蘇糖醇5g的原裝瓶中加32.4ml水,分成小份貯存于-20℃?;蜣D(zhuǎn)移100mg的二硫蘇糖醇
至微量離心管,加0.65ml的水配制成1mol/L二硫蘇糖醇溶液。
5mol/L氯化鈉(NaCl):溶解29.2g氯化鈉于足量的水中,定容至100ml。
10N(NaOH):溶解400g顆粒于約0.9L水的燒杯中(磁力攪拌器攪拌),完全溶解后用水定容至1L。
10%SDS(十二烷基硫酸鈉):稱取100gSDS慢慢轉(zhuǎn)移到約含0.9L的水的燒杯中,用磁力攪拌器攪拌直至完全溶解。用水定容至1L。
2mol/L山梨(糖)醇(Sorbitol):溶解36.4g山梨(糖)醇于足量水中使終體積為100ml。