無細胞系統(tǒng)是利用細胞提取物（而不是細胞）進行基因轉(zhuǎn)錄和翻譯的系統(tǒng)。一個無細胞基因表達系統(tǒng)主要包括三個部分：細胞提取物，反應(yīng)混合液，以及核酸模板

1.細胞提取物：從細胞中提取的物質(zhì)，主要包含核糖體、RNA聚合酶、其他轉(zhuǎn)錄和翻譯蛋白（比如σ因子、起始因子和延伸因子），以及用于能量代謝的酶和輔因子。在有些菌株的提取物中，可能抑制了蛋白酶和核酸酶的活性。

2.反應(yīng)混合液：包含蛋白質(zhì)合成所需的一些原料，如氨基酸、核苷酸、鹽離子（如銨鹽、鎂、鉀）、能源（糖類、磷酸肌酸等）、擁擠試劑（crowding agents）、代謝輔因子（輔酶A、NAD）、緩沖液、tRNA以及其他代謝添加劑等。

3.核酸模板：可以是質(zhì)粒DNA或PCR產(chǎn)物線裝DNA，濃度通常在1-20 nM。

無細胞系統(tǒng)一般的反應(yīng)體積為10微升，但是根據(jù)其實際應(yīng)用，反應(yīng)體系可以從10^(-15)到10^3變化。在開始反應(yīng)時，將三種組分在16-37℃下孵育，蛋白質(zhì)合成將在1-24h內(nèi)進行。

folin―酚試劑法（lowry法）是蛋白質(zhì)測定法中較靈敏的方法之一。過去此法是應(yīng)用相對廣泛的一種方法，由于其試劑乙的配制較為困難（現(xiàn)在已可以訂購），近年來逐漸被考馬斯亮蘭法所取代。此法的顯色原理與雙縮脲方法是相同的，只是加入了第二種試劑，即folin―酚試劑，以增加顯色量，從而提高了檢測蛋白質(zhì)的靈敏度。這兩種顯色反應(yīng)產(chǎn)生深蘭色的原因是：在堿性條件下，蛋白質(zhì)中的肽鍵與銅結(jié)合生成復(fù)合物。folin―酚試劑中的磷鉬酸鹽―磷鎢酸鹽被蛋白質(zhì)中的酪氨酸和苯丙氨酸殘基還原，產(chǎn)生深蘭色（鉬蘭和鎢蘭的混合物）。在一定的條件下，蘭色深度與蛋白的量成正比。

蛋白質(zhì)二硫鍵異構(gòu)酶

分泌蛋白需要通過在分子內(nèi)或分子間形成二硫鍵，從而形成其天然構(gòu)象。蛋白二硫鍵異構(gòu)酶，可以催化這些二硫鍵的形成和異構(gòu)化。PDI一方面可以通過二硫鍵異構(gòu)酶活性促進蛋白內(nèi)或蛋白間形成正確的二硫鍵，另一方面也可以催化某些蛋白的二硫鍵的水解。

在肽鏈分部快速折疊成蛋白質(zhì)過程中，抑制半胱氨酸之間形成錯誤位置的二硫鍵的酶。

胰蛋白酶與胰酶的區(qū)別

胰酶與胰蛋白酶的是同一種物質(zhì)嗎？相信很多人并不能分清兩者的區(qū)別。胰酶顧名思義是由動物胰臟中提取的多種酶組成的混合物酶制劑，主要為胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶，其主要成分為胰蛋白酶。要想更深入的了解兩者的關(guān)系，我們先從人體內(nèi)zui重要的器1官胰臟說起。

胰1腺分泌出的胰液含有胰蛋白蛋白酶、胰脂肪酶、胰淀粉酶，主要成分為胰蛋白酶，屬肽鏈內(nèi)切酶。胰臟是我們身體上一個非常不顯眼的小器1官——胰臟，胰臟有兩部分，一是胰1腺，是外分泌腺，產(chǎn)生胰液；二是胰島，是內(nèi)分1泌腺，產(chǎn)生胰島素，胰1腺分泌出的胰液經(jīng)胰管輸入到十二指腸，胰液含有胰蛋白酶、胰淀粉酶、胰脂肪酶等多種物質(zhì)，可作用于腸道分解蛋白質(zhì)、脂肪和糖的作用。

胰蛋白酶是由胰1腺分泌的一種蛋白水解酶，在動物中作為消化酶而起作用，主要作用于精氨酸或賴氨酸羧基端的肽鍵，蛋白質(zhì)分解為氨基酸、氨基酸多肽等，再被人體腸道吸收到人體各組織中去，所以胰蛋白酶在食物消化中起到至關(guān)重要的作用。