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細(xì)胞實(shí)驗(yàn)介紹——細(xì)胞運(yùn)動(dòng)能力檢測:
細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移能力和修復(fù)能力快捷的檢測方法。在長滿的細(xì)胞培養(yǎng)板或者培養(yǎng)皿中,沿著中線使用移液器槍頭或者其他硬物劃1-3條平行的直線,去除中線的細(xì)胞,細(xì)胞在0h、12h、24h后,觀察細(xì)胞往中線遷移情況,判斷細(xì)胞遷移能力。
一般流程:細(xì)胞接種培養(yǎng)-劃痕-不同時(shí)間點(diǎn)拍照
細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)是體外模擬細(xì)胞遷移和侵襲能力的檢測方法。使用不同孔徑的聚碳酸酯膜transwell小室放入培養(yǎng)板中,將細(xì)胞接種于小室中,利用培養(yǎng)液成分的差異誘導(dǎo)細(xì)胞運(yùn)動(dòng),檢測細(xì)胞的遷移和侵襲能力的差異。
一般流程:transwell小室準(zhǔn)備-細(xì)胞接種-細(xì)胞培養(yǎng)-transwell小室染色-顯微鏡拍照
結(jié)果示例:
圖 A 細(xì)胞劃痕實(shí)驗(yàn)圖;B,C 細(xì)胞遷移和侵襲實(shí)驗(yàn)圖
3D細(xì)胞培養(yǎng)
3D多細(xì)胞腫liu球是在體外應(yīng)用組織培養(yǎng)方法使腫liu細(xì)胞以多細(xì)胞集聚體的形式生長成為具有三維結(jié)構(gòu)的球體。與傳統(tǒng)的2D貼壁細(xì)胞培養(yǎng)模型相比,3D多細(xì)胞腫liu球可以通過模擬三維細(xì)胞網(wǎng)絡(luò)、細(xì)胞與基質(zhì)、細(xì)胞與細(xì)胞之間的相互作用,從而更加貼近腫liu組織中相應(yīng)的病理生理特征。因此, 3D多細(xì)胞腫liu球培養(yǎng)模型已經(jīng)逐漸應(yīng)用于gan細(xì)胞培養(yǎng)和分化、ai癥研究、yao物和毒性篩選及組織工程等特定應(yīng)用中。雖然3D多細(xì)胞腫liu球模型具有更顯著的實(shí)體腫liu生理相關(guān)性,但是與2D貼壁細(xì)胞培養(yǎng)模型相比,獲得大量相對統(tǒng)一的3D多細(xì)胞腫liu球模型需要-系列的培養(yǎng)過程和表征手段。
透射電鏡觀察自噬小體方法
利用光學(xué)顯微鏡,借助相應(yīng)的染色方法,可以觀察細(xì)胞凋亡時(shí)會(huì)出現(xiàn)的一系列形態(tài)特征。常用的染色法包括臺(tái)盼藍(lán)、橙 / 化乙啶(AO/EB)、Giemsa 和 HE 法等。在光學(xué)顯微鏡下可以觀察到核固縮、質(zhì)濃縮和凋亡小體等典型的凋亡現(xiàn)象。
電鏡形態(tài)學(xué)觀察法是一種比較經(jīng)典、可靠的方法,被認(rèn)為是確定細(xì)胞凋亡的金標(biāo)準(zhǔn)。電鏡下凋亡細(xì)胞表現(xiàn)為染色質(zhì)凝集、核濃縮、核裂解、胞漿收縮和胞膜具有發(fā)泡現(xiàn)象及凋亡小體出現(xiàn)等。