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Tris理化性質(zhì):
英文名 Trometamol
中文名: 三羥
分子量: 121.135
分子式: (HOCH2)3CNH2
外觀: 白色晶體粉末
溶解性:溶于水和乙醇,微溶于、苯,不溶于、。
pKa:室溫下為8.1,水溶液pH10.5
緩沖范圍:7.0-9.2
Tris緩沖液通常被用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑,由于生物緩沖劑Tris的2號位碳原子連有氨基,水溶液呈堿性,DNA溶解于此溶液時會被去質(zhì)子化,從而提高溶解性。作為緩沖劑時,Tris通常需要搭配弱酸使用,比如搭配鹽酸使用或者直接做成Tris-HCl鹽。除了搭配比較多的HCl外,還經(jīng)常與醋酸、硼酸搭配使用,以及電泳緩沖液中搭配甘氨酸使用。
Tris緩沖液不僅被廣泛用作核酸和蛋白質(zhì)的溶劑,還有許多重要用途。Tris被用于不同pH條件下的蛋白質(zhì)晶體生長。Tris緩沖液的低離子強度特點可用于線蟲(C. elegans)核纖層蛋白(lamin)的中間纖維的形成。Tris也是蛋白質(zhì)電泳緩沖液的主要成分之一。此外,Tris還是制備表面活性劑、硫化促進劑和一些的中間物。Tris也被用作滴定標準物。緩沖特性Tris為弱堿,在室溫(25℃)下,它的pKa為8.1;根據(jù)緩沖理論,Tris緩沖液的有效緩沖范圍在pH7.0到9.2之間。Tris堿的水溶液pH在10.5左右,一般加入鹽酸以調(diào)節(jié)pH值至所需值,即可獲得該pH值的緩沖液。但同時應(yīng)注意溫度對于Tris的pKa的影響。
常用作緩沖溶液的酸類由弱酸及其共軛酸鹽組合成的溶液具有緩沖作用。常見的緩沖體系有:
1、弱酸和它的鹽(如HAc---NaAc)
2、弱堿和它的鹽(NH3·H2O---NH4Cl)
3、多元弱酸的酸式鹽及其對應(yīng)的次級鹽(如NaH2PO4---Na2HPO4)的水溶液組成。
而生化實驗室常用的緩沖系主要有磷酸、檸檬酸、碳酸、醋酸、酸、Tris(三羥)等系統(tǒng),生化實驗或研究工作中要慎重地選擇緩沖體系,因為有時影響實驗結(jié)果的因素并不是緩沖液的pH值,而是緩沖液中的某種離子。如硼酸鹽、檸檬酸鹽、磷酸鹽和三羥等緩沖劑都可能產(chǎn)生不需要的化學反應(yīng)。
一旦確定了緩沖液的pH值,就需要選擇使用什么樣的緩沖體系。首先是在選擇緩沖體系時要確保選擇的緩沖體系在你設(shè)定的pH值上確實具有緩沖能力。選擇的緩沖體系,其解離常數(shù)pKa值應(yīng)該在設(shè)定的pH上下一個pH值單位內(nèi)。
再者是確保你使用的緩沖液濃度足夠高以達到實際緩沖溶液的作用,正常一般選擇的濃度是20~100mM。需要記住的是你所使用的緩沖體系不應(yīng)該影響蛋白活性!例如,磷酸鹽會抑制激酶的活性,所以反應(yīng)前應(yīng)徹底地透析掉。