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即用型Tris-HCl緩沖溶液,這個(gè)不需要配置了,采購(gòu)時(shí)根據(jù)需要買對(duì)應(yīng)pH的試劑就行。這個(gè)使用起來是快的,不過市場(chǎng)上產(chǎn)品的pH值是固定的幾個(gè)值,如果需要某一特定的pH,會(huì)比較難找,可能還是自己配置,這樣就得不償失了。需要注意的是,不管是哪一種類型的Tris試劑,都有幾個(gè)相同的特點(diǎn):Tris對(duì)溫度敏感,因此調(diào)節(jié)pH時(shí)需控制在室溫;濃度改變對(duì)pH有顯著影響,緩沖液稀釋過度會(huì)改變pH值,降低緩沖能力;容易吸收空氣中的CO2,要做好密封工作。
三羥氨基CAS77-86-1,就是通常所說的Tris,也叫氨,是一種很常用的試劑,在工業(yè)合成、生化檢測(cè)、生物制藥領(lǐng)域都有廣泛應(yīng)用;在采樣管病毒保存液中,屬于其配置溶液的一種重要的原料。三羥氨基Tris分子結(jié)構(gòu)中含有一個(gè)氨基和三個(gè)醇羥基,氨基和三個(gè)羥圍繞中心碳原子形成類似的四面體結(jié)構(gòu)。由于氨基的存在,Tris在水溶液中顯弱堿性,氨基可作為配位基團(tuán)和很多酸形成Tris鹽,常見的有Tris-HCl,還有TEA、TEB、Tris甘氨酸、Tris磷酸等。病毒保存液中用的原料Tris和EDTA,實(shí)際TE緩沖液就是Tris加EDTA。
很多實(shí)驗(yàn)的pH值設(shè)定在 7.4以模仿生物條件。假如你的蛋白在這個(gè)pH值下是穩(wěn)定的,那就非常棒了!如果不是,就需要改變pH值找到目的蛋白在溶液中處于可溶性且不會(huì)降解的狀態(tài)。
一個(gè)經(jīng)驗(yàn)法則是:蛋白在它等電點(diǎn)pI附近的pH值溶液中會(huì)表現(xiàn)得不易溶解,因?yàn)榈鞍自谄涞入婞c(diǎn)的pH值溶液中表面沒有凈電荷,從而容易聚集。這里推薦用Expasy的ProtParam工具快速簡(jiǎn)便地計(jì)算蛋白等電點(diǎn)pI值,只要提交蛋白序列即可。