你對(duì)制備色譜陌生嗎？還不進(jìn)來看看它的特點(diǎn)

很多初接觸色譜領(lǐng)域的朋友對(duì)制備色譜這個(gè)名詞比較陌生。其實(shí)，在化學(xué)化工醫(yī)學(xué)等廣泛采用的層析法以及薄層色譜就是較為典型的制備色譜，換句話說，將分析色譜的進(jìn)樣量增大，同時(shí)得出大量的所需物質(zhì)（餾分）的過程就可以稱為制備色譜。分析色譜的目的，是分析出混合物中一個(gè)（或者幾個(gè)）純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的，是從混合物中得到純物質(zhì)。而制備色譜系統(tǒng)則是利用制備色譜的思想能得到純化物質(zhì)的多個(gè)分析測試設(shè)備聯(lián)用的總稱。     分析色譜是制備色譜的基礎(chǔ)。當(dāng)我們?cè)诜治錾V上取得了良好的分離效果時(shí)，可以將其放大，應(yīng)用到制備色譜上，由此，我們需要考慮調(diào)整上樣量，流速，梯度：     

1.上樣量的調(diào)整：     他與分析色譜柱和制備色譜柱的柱長和柱內(nèi)徑有關(guān)：     

具體關(guān)系時(shí)；制備柱上樣量/分析柱上樣量=制備柱長/分析柱長*制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；     

2.流速的調(diào)整：     

制備柱流速/分析柱流速=制備柱體積/分析柱體積=制備柱長/分析柱長制備柱內(nèi)徑的平方/分析柱內(nèi)徑的平方；     

3.梯度的調(diào)整：     

制備柱梯度/分析柱梯度=制備柱體積/分析柱體積*制備柱流速/分析柱流速；

液相色譜的分離過程

同其他色譜過程一樣，HPLC也是溶質(zhì)在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行的一種連續(xù)多次交換過程。它借溶質(zhì)在兩相間分配系數(shù)、親和力、吸附力或分子大小不同而引起的排阻作用的差別使不同溶質(zhì)得以分離。

開始樣品加在柱頭上，假設(shè)樣品中含有3個(gè)組分，A、B和C，隨流動(dòng)相一起進(jìn)入色譜柱，開始在固定相和流動(dòng)相之間進(jìn)行分配。分配系數(shù)小的組分A不易被固定相阻留，較早地流出色譜柱。分配系數(shù)大的組分C在固定相上滯留時(shí)間長，較晚流出色譜柱。組分B的分配系數(shù)介于A，C之間，第二個(gè)流出色譜柱。若一個(gè)含有多個(gè)組分的混合物進(jìn)入系統(tǒng)，則混合物中各組分按其在兩相間分配系數(shù)的不同先后流出色譜柱，達(dá)到分離之目的。

不同組分在色譜過程中的分離情況，首先取決于各組分在兩相間的分配系數(shù)、吸附能力、親和力等是否有差異，這是熱力學(xué)平衡問題，也是分離的首要條件。

其次，當(dāng)不同組分在色譜柱中運(yùn)動(dòng)時(shí)，譜帶隨柱長展寬，分離情況與兩相之間的擴(kuò)散系數(shù)、固定相粒度的大小、柱的填充情況以及流動(dòng)相的流速等有關(guān)。所以分離效果則是熱力學(xué)與動(dòng)力學(xué)兩方面的綜合效益。

液相色譜技術(shù)在硝基苯降解過程中的應(yīng)用

研究了納米零價(jià)鐵還原降解硝基苯的中間產(chǎn)物和產(chǎn)物, 采用液相色譜技術(shù)分析硝基苯降解的部分中間產(chǎn)物。為分析納米零價(jià)鐵還原降解硝基苯的機(jī)理提供信息, 從而為進(jìn)一步提高零價(jià)鐵降解效果提供科學(xué)參考。

除了通過對(duì)色譜峰的質(zhì)譜圖進(jìn)行譜庫檢索定性外，還通過標(biāo)準(zhǔn)樣品進(jìn)行保留至對(duì)照，這樣可以提高定性的可靠性。

(1)苯胺

譜庫檢索中我們查到降解產(chǎn)物中保留時(shí)間為4.004 min的色譜峰為苯胺(多次重復(fù)后沒變化)。同時(shí)我們配制苯酚標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣, 苯酚的色譜峰的保留時(shí)間也為4.009 min, 進(jìn)一步證實(shí)降解產(chǎn)物的色譜圖中保留時(shí)間為4.004 min 的色譜峰確實(shí)為苯胺的色譜峰。

(2)硝基苯

通過譜庫檢索, 未降解完全的硝基苯的色譜峰在色譜圖中保留時(shí)間為6.174 min處。配制硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣, 硝基苯的色譜峰的保留時(shí)間也在6.200 min, 進(jìn)一步證實(shí)降解產(chǎn)物的色譜圖中保留時(shí)間為6.174 min的色譜峰確實(shí)為未講解完的硝基苯的色譜峰。

(3)亞硝基苯

通過譜庫檢索, 降解產(chǎn)物的色譜圖中保留時(shí)間為6.750 min的色譜峰為亞硝基苯。配制亞硝基苯標(biāo)準(zhǔn)溶液進(jìn)樣, 亞硝基苯的色譜峰的保留時(shí)間也為6.900 min, 證實(shí)降解產(chǎn)物的色譜圖中保留時(shí)間為6.900 min的色譜峰確實(shí)為亞硝基苯的色譜峰。

(4)雜峰

分析這兩個(gè)峰，我們并與溶劑峰進(jìn)行了對(duì)比，發(fā)現(xiàn)這兩個(gè)峰是我們所用的溶劑所產(chǎn)生的。

(5)我們通過質(zhì)量守恒計(jì)算了硝基苯降解前后的質(zhì)量，發(fā)現(xiàn)：硝基苯在降解過程中有中間體的產(chǎn)生，我們稱之為苯基羥胺，之所以我們色譜圖沒有發(fā)現(xiàn)這個(gè)中間體的色譜峰，主要是因?yàn)樗拇嬖跁r(shí)間很短，在我所用的實(shí)驗(yàn)條件下還不能夠準(zhǔn)備快速測定出來，希望后續(xù)研究可以進(jìn)行測定。