色譜法的應(yīng)用可以根據(jù)目的分為制備性色譜和分析性色譜兩大類。制備性色譜的目的是分離混合物,獲得一定數(shù)量的純凈組分,這包括對有機合成產(chǎn)物的純化、天然產(chǎn)物的分離純化以及去離子水的制備等。相對于色譜法出現(xiàn)之前的純化分離技術(shù)如重結(jié)晶,色譜法能夠在一步操作之內(nèi)完成對混合物的分離,但是色譜法分離純化的產(chǎn)量有限,只適合于實驗室應(yīng)用。制備色譜到底是什么?(1)分析色譜的目的,是分析出混合物中一個(或者幾個)純物質(zhì)的含量。制備色譜的目的,是從混合物中得到純物質(zhì)。為了加快分離的時間與提高分離的效率,制備色譜的的進樣品量很大,導(dǎo)致制備色譜柱子的分離負荷的相應(yīng)加大,也就必須加大色譜柱填料,增大制備色譜的直徑和長度,使用的相對多的流動相。然而,當(dāng)色譜柱上樣品負載加大的時候,往往導(dǎo)致柱效急劇下降而得不到純的產(chǎn)品。制備色譜,要解決容量與柱子效果之間的矛盾,對重現(xiàn)性也要考慮。從經(jīng)濟上來說。制備色譜要爭取少用填料,少用溶劑,要盡可能多的得到產(chǎn)品。(2)樣品的前處理:制備色譜柱子由于處理的樣品多,比分析柱子更容易受污染,所以,必要的前處理就顯得非常的必要。接通載氣當(dāng)色譜柱與進樣口接好后,通載氣,調(diào)節(jié)柱前壓以得到合適的載氣流速。萃取、過濾、結(jié)晶、固相萃取等簡單的分離方法,如果用得上,而且還不是很麻煩,就要盡可能多的采用以去掉雜質(zhì)。(3)固定相的選擇硅膠、鍵合固定相(如C18)、離子交換樹脂、聚酰胺、氧化鋁、凝膠等都可以作為色譜柱的填料。 有不少文獻報道,對填料可以進行一下處理提高了分離效果,如,對硅膠進行的(或緩沖液)處理。

在運作的過程中液相色譜儀的分析速度是非??斓?,載液的流速也非???,所以它能夠很快的得出結(jié)果,有的分析樣品可以在15到半個小時內(nèi)得出結(jié)果,有的只需要五分鐘就夠了,這是因為不同液體的成分不同,所以得出結(jié)果的速度也完全不一樣,大部分的液體時間都低于一個小時,從中我們可以看出液相色譜儀的工作效率?,F(xiàn)在的液相色譜儀有著的特點,首先就體現(xiàn)在它的分離效果非常好,大家可以自由的選擇固體流動或者是液體流動,根據(jù)你所選擇的效果能夠達到Z佳的分離效果,同時這要比工業(yè)精餾塔和色相譜的分析更加,測量出來的結(jié)果一般是不會有任何錯誤的,這是液相色譜儀非常厲害的一點。后,液相色譜儀的靈敏度也是非常高的,它可以用紫外檢測器進行檢測,結(jié)果的度非常高。將色譜柱連接于檢測器上其安裝和所需注意的事項與色譜柱與進樣口連接大致相同。由此我們可以看出,液相色譜儀的優(yōu)點是非常多的,正是因為它的優(yōu)點很多,人們才愿意去使用它,在使用了液相色譜儀之后大家獲得了極大的方便,相信以后它會變得更加普及的。
超液相色譜法(HPLC)是繼氣相色譜之后,70年代初期發(fā)展起來的一種以液體做流動相的新色譜技術(shù)。 超液相色譜是在氣相色譜和經(jīng)典色譜的基礎(chǔ)上發(fā)展起來的?,F(xiàn)代液相色譜和經(jīng)典液相色譜沒有本質(zhì)的區(qū)別。不同點僅僅是現(xiàn)代液相色譜比經(jīng)典液相色譜有較高的效率和實現(xiàn)了自動化操作。經(jīng)典的液相色譜法,流動相在常壓下輸送,所用的固定相柱效低,分析周期長。而現(xiàn)代液相色譜法引用了氣相色譜的理論,流動相改為高壓輸送(高輸送壓力可達4.9?107Pa);色譜柱是以特殊的方法用小粒徑的填料填充而成,從而使柱效大大高于經(jīng)典液相色譜;同時柱后連有高靈敏度的檢測器,可對流出物進行連續(xù)檢測。因此,液相色譜具有分析速度快、分離效能高、自動化等特點。所以人們稱它為高壓、高速、或現(xiàn)代液相色譜法。顆粒類型主要有全多孔和表面多孔,全多孔填料具有更大的柱容量、更多鍵合相選擇的優(yōu)點,表面多孔具有反壓低、峰形好的優(yōu)點。