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熒光光譜特點(diǎn)
靈敏度更高 g/ml,應(yīng)用不如UV廣泛。應(yīng)用:①直接熒光光度法②作為HPLC的檢測(cè)器(用的多)根據(jù)物質(zhì)分子吸收光譜和熒光光譜能級(jí)躍遷機(jī)理,具有吸收光子能力的物質(zhì)在特定波長(zhǎng)光(如紫外光)照射下可在瞬間發(fā)射出比激發(fā)光波長(zhǎng)長(zhǎng)的光,即熒光。 分子受特定光照射后處于激發(fā)態(tài)的 分子返回基態(tài)時(shí)發(fā)出熒光, 其熒光強(qiáng)度與 呈線性關(guān)系, 從而可測(cè)出氣體濃度。當(dāng)檢測(cè)儀器系統(tǒng)確定后,熒光總光強(qiáng)I與 濃度的之間的關(guān)系可表示為:I=KC在穩(wěn)定的條件下,這些參數(shù)也隨之確定,k可視為常數(shù)。因此,式中I=kC表示的紫外熒光光強(qiáng)I與樣氣的濃度C成線性關(guān)系。這是紫外熒光法進(jìn)行定量檢測(cè)的重要依據(jù)。
熒光光譜定量分析
在低濃度時(shí),溶液的熒光強(qiáng)度與熒光物質(zhì)的濃度成正比:F=Kc。其中,F(xiàn)為熒光強(qiáng)度,c為熒光物質(zhì)濃度,K為比例系數(shù)。這就是熒光光譜定量分析的依據(jù)。
上述關(guān)系不適用于熒光物質(zhì)濃度過(guò)高時(shí),熒光物質(zhì)濃度過(guò)高,其熒光強(qiáng)度反而降低。原因有:
(1)內(nèi)濾效應(yīng)。一是,當(dāng)溶液濃度過(guò)高時(shí),溶液中雜質(zhì)對(duì)入射光的吸收作用增大,相當(dāng)于降低了激發(fā)光的強(qiáng)度。二是,濃度過(guò)高時(shí),入射光被液池前部的熒光物質(zhì)強(qiáng)烈吸收,處于液池中、后部的熒光物質(zhì),則因受到入射光大大減弱而使熒光強(qiáng)度大大降低;而儀器的探測(cè)窗口通常對(duì)準(zhǔn)液池中部,從而導(dǎo)致檢測(cè)到的熒光強(qiáng)度大大降低。
(2)相互作用。較高濃度溶液中,可發(fā)生溶質(zhì)間的相互作用,產(chǎn)生熒光物質(zhì)的激發(fā)態(tài)分子與其基態(tài)分子的二聚物或其他溶質(zhì)分子的復(fù)合物,從而導(dǎo)致熒光光譜的改變和/或熒光強(qiáng)度下降。當(dāng)濃度更大時(shí),甚至?xí)纬蔁晒馕镔|(zhì)的基態(tài)分子聚集體,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度更嚴(yán)重下降。
(3)自淬滅。熒光物質(zhì)的發(fā)射光譜與其吸收光譜呈現(xiàn)重疊,便可能發(fā)生所發(fā)射的熒光被部分再吸收的現(xiàn)象,導(dǎo)致熒光強(qiáng)度下降。溶液濃度增大時(shí)會(huì)促使再吸收現(xiàn)象加劇。
當(dāng)然,熒光強(qiáng)度的影響因素還有溶劑、溫度、pH值、散射光等,在定量分析中需要加以考慮。
熒光光譜定量分析的計(jì)算與其他光譜類似,包括標(biāo)準(zhǔn)曲線法、比例法等。
原子熒光光譜儀
原子熒光光度計(jì)利用惰性氣體氣作載氣,將氣態(tài)氫化物和過(guò)量氫氣與載氣混合后,導(dǎo)入加熱的原子化裝置,氫氣和氣在火焰裝置中燃燒加熱,氫化物受熱以后迅速分解,被測(cè)元素離解為基態(tài)原子蒸氣,其基態(tài)原子的量比單純加熱、銻、鉍、錫、硒、碲、鉛、鍺等元素生成的基態(tài)原子高幾個(gè)數(shù)量級(jí)。原子熒光分析儀分非色散型原子熒光分析儀與色散型原子熒光分析儀。這兩類儀器的結(jié)構(gòu)基本相似,差別在于單色器部分。