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所謂電泳技術(shù),即利用電泳現(xiàn)象進(jìn)行物質(zhì)分離的技術(shù),而電泳是一種帶電離子在電場中向著電性相反的電極方向移動(dòng)的現(xiàn)象。電泳技術(shù)已被廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)、多肽、核酸等生物大分子的臨床研究。 電泳技術(shù)的類型多種多樣,按分離的原理可分為區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳等。按有無固體支持物可分為自由電泳和區(qū)帶電泳,前者包括顯微鏡電泳(細(xì)胞電泳)、移界電泳、柱電泳、自由流動(dòng)幕電泳等;后者包括濾紙電泳、薄層電泳(薄膜或薄板)、凝膠電泳(瓊脂糖、瓊脂、淀粉膠等。
當(dāng)電流通過電泳設(shè)備的電泳漆時(shí),水發(fā)生電解,在陰極和陽極上分別有氫和氧析出,成為氣泡放出。以可溶性金屬作陽極時(shí),會(huì)有少量實(shí)踐證明,電泳時(shí)應(yīng)盡量不用過高電壓,在保證質(zhì)量前提下,縮短電泳時(shí)間,井且維持一定的槽液濃度。同時(shí),嚴(yán)防槽液中其它雜質(zhì)離子含量升高。電泳設(shè)備是指帶電粒子在電場的作用下,在一定介質(zhì)(溶劑)中所發(fā)生的向異性電極定向移動(dòng)的現(xiàn)象。
電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變,進(jìn)而影響其電泳遷移的速度,所以電泳設(shè)備工作時(shí)應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。電泳設(shè)備裝置主要包括兩個(gè)部分:電源和電泳槽電源提供直流電,在電泳槽中產(chǎn)生電場,驅(qū)動(dòng)帶電分子的遷移。由于pH值的改變會(huì)引起帶電分子電荷的改變,進(jìn)而影響其電泳遷移的速度,所以電泳設(shè)備工作時(shí)應(yīng)在適當(dāng)?shù)木彌_液中進(jìn)行的,緩沖液可以保持待分離物的帶電性質(zhì)的穩(wěn)定。
電泳設(shè)備槽可以分為水平式和垂直式兩類:
1垂直板式電泳是較為常見的一種,常用于電泳中蛋白質(zhì)的分離。電泳槽中間是夾在一起的兩塊玻璃板,玻璃板兩邊由塑料條隔開,在玻璃平板中間制備電泳凝膠,凝膠的大小通常是12cm~14 cm,厚度為1mm~2 mm,近年來新研制的電泳槽,膠面更小、更薄,以節(jié)省試劑和縮短電泳設(shè)備的工作時(shí)間。
2水平式電泳設(shè)備,凝膠鋪在水平的玻璃或塑料板上,用一薄層濕濾紙連接凝膠和電泳設(shè)備緩沖液,或?qū)⒛z直接浸入緩沖液中。制膠時(shí)在凝膠溶液中放一個(gè)塑料梳子,在膠聚合后移去,形成上樣品的凹槽。