PCR儀

簡單的說，PCR就是利用DNA聚合酶對特定基因做體外或試管內(nèi)In Vitro的大量合成，基本上它是利用DNA聚合酶進(jìn)行專一性的連鎖拷貝。目前常用的技術(shù)，可以將一段基因拷貝為原來的一百億至一千億倍。根據(jù)DNA擴(kuò)增的目的和檢測的標(biāo)準(zhǔn)，可以將PCR儀分為普通PCR儀，梯度PCR儀，原位PCR儀，實(shí)時熒光定量PCR儀四類。

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PCR儀基本要素

基本的PCR須具備

1.要被拷貝的DNA模板 Template

2.界定拷貝范圍兩端的引物Primers.

3.DNA聚合酶Taq. Polymearse

4.合成的原料（四種脫氧核苷酸）及水。

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PCR儀的改進(jìn)與完善

Mullis起初使用的DNA聚合酶是 DNA 聚合酶 I 的Klenow片段，1988年初，Keohanog改用T4 DNA聚合酶進(jìn)行PCR，其擴(kuò)增的DNA片段很均一，真實(shí)性也較高，只有所期望的一種DNA片段。但每循環(huán)一次，仍需加入新酶。1988年Saiki 等從溫泉中分離的一株水生嗜thermus aquaticus 中提取到一種耐熱DNA聚合酶。 

此酶具有以下特點(diǎn)：

①耐高溫，在70℃下反應(yīng)2h后其殘留活性大于原來的90%，在93℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的60%，在95℃下反應(yīng)2h后其殘留活性是原來的40%。

②在熱變性時不會被鈍化，不必在每次擴(kuò)增反應(yīng)后再加新酶。

③大大提高了擴(kuò)增片段特異性和擴(kuò)增效率，增加了擴(kuò)增長度2.0Kb。由于提高了擴(kuò)增的特異性和效率，因而其靈敏性也大大提高。為與大腸多聚酶IKlenow片段區(qū)別，將此酶命名為TaqDNA多聚酶Taq DNAPolymerase。此酶的發(fā)現(xiàn)使PCR廣泛的被應(yīng)用。

PCR技術(shù)

PCR技術(shù)神奇就神奇在以下幾個特點(diǎn)上：一是被擴(kuò)增的DNA所需量特別小，理論上講一個分子就可以用于擴(kuò)增了；二是擴(kuò)增，目的基因的量成指數(shù)形式擴(kuò)增，幾個小時就擴(kuò)增1000萬倍以上?，F(xiàn)在PCR技術(shù)已經(jīng)被廣泛地應(yīng)用于生命科學(xué)研究、食品衛(wèi)生、法醫(yī)及環(huán)境監(jiān)測等諸多方面，真不愧是“獲得諾貝爾獎”的好技術(shù)！