傳統(tǒng)結(jié)晶板蛋白質(zhì)晶體板比較

在20℃時(shí)雖然微流控芯片上的結(jié)晶條件數(shù)少于24孔結(jié)晶板(67 vs 94),但主要是嗜熱菌蛋白酶的結(jié)晶條件數(shù)顯著減少,其他4種蛋白在兩種方法上均有相近的結(jié)晶條件數(shù),表明微流控芯片能以接近24孔結(jié)晶板的效率進(jìn)行蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選.但是,在4℃時(shí)微流控芯片與24孔結(jié)晶板有60%的結(jié)晶條件不同,20℃時(shí)有90%的結(jié)晶條件不同,這表明目前的這種微流控芯片還不能直接代替?zhèn)鹘y(tǒng)的24孔結(jié)晶板,它可以作為蛋白質(zhì)結(jié)晶篩選時(shí)的一種補(bǔ)充方式。

蛋白結(jié)晶板使用

用于人工和高通量蛋白晶體生長(zhǎng)以及其他生物或有機(jī)晶體生長(zhǎng)的設(shè)備和方法.一微孔板包含多個(gè)單元格,以及一限定微孔板中單元格的邊框.在每個(gè)單元格中至少存在一個(gè)上部開口的孔.單元格中的每個(gè)孔底部可以封閉,或者其底部是開口的,但孔底部由一獨(dú)立部件封閉,其可以為獨(dú)立的膜或板(例如塑料,玻璃或金屬)或一模制部件。

獲得晶體及提高晶體質(zhì)量是蛋白質(zhì)結(jié)晶方法學(xué)中的兩大基本問(wèn)題.為解決這兩個(gè)問(wèn)題,結(jié)構(gòu)生物學(xué)家已發(fā)展了許多方法,其中針對(duì)蛋白質(zhì)本身進(jìn)行分子改造是非常重要的方法之一.通過(guò)蛋白質(zhì)工程技術(shù),如突變,還原化修飾,剪切或刪除構(gòu)象柔性環(huán)區(qū),融合蛋白,復(fù)合物共結(jié)晶,原位蛋白質(zhì)水解等方法對(duì)蛋白質(zhì)本身進(jìn)行分子改造。

蛋白質(zhì)晶體板

進(jìn)而進(jìn)行衍射得到蛋白質(zhì)結(jié)構(gòu)相關(guān)信息.蛋白質(zhì)結(jié)晶需要經(jīng)歷從未飽和區(qū)經(jīng)亞穩(wěn)區(qū)至形核區(qū)的形核過(guò)程以及從形核區(qū)到亞穩(wěn)區(qū)的生長(zhǎng)成熟過(guò)程.在整個(gè)蛋白質(zhì)結(jié)晶過(guò)程中,形核過(guò)程是至關(guān)重要的一步，形核勢(shì)壘低.因而形核劑的使用對(duì)于難結(jié)晶蛋白或者起始濃度過(guò)低的蛋白質(zhì)結(jié)晶具有重要意義.隨著結(jié)構(gòu)生物學(xué)的發(fā)展,形核劑在蛋白質(zhì)結(jié)晶中的研究仍是結(jié)晶方法學(xué)領(lǐng)域的熱點(diǎn)問(wèn)題。