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武漢默沙克生物????科技有限公司是一家專門從事生物制劑研發(fā)與生產(chǎn)的企業(yè)。目前可提供各種抗1體、免疫學(xué)試劑盒、生化試劑、ELISA試劑盒、分子生物學(xué)試劑等多用途多屬種的高品質(zhì)產(chǎn)品,服務(wù)涉及分子生物學(xué)、細(xì)胞生物學(xué)、免疫學(xué)等生命科學(xué)領(lǐng)域。
1.取材
切取的組織塊不宜太大,以利于固定劑穿透,通常以6mm×6mm×5mm為宜。
注意事項(xiàng):
(1)取材動(dòng)作要迅速,不宜作太久的拖延以免組織細(xì)胞的成分、結(jié)構(gòu)等發(fā)生變化。
(2)切片材料應(yīng)根據(jù)需要觀察的部位進(jìn)行選,盡可能不要損傷所需要的部分。
2.固定
將切好的組織用生理鹽水組織洗3次,立即投入10%中性1福爾1馬林固定液或4%多聚甲醛中固定,固定36小時(shí)。
(1)一般固定液,都以新配為好,配好后應(yīng)貯存在陰涼處,不宜放在日光下,以免引起化學(xué)變化,失去固定作用。
封藏的方法:
封片前應(yīng)根據(jù)材料的大小,選用不同規(guī)格的蓋玻片。1.取材切取的組織塊不宜太大,以利于固定劑穿透,通常以6mm×6mm×5mm為宜。材料透明后,在桌上放一張潔凈的吸水紙,將含材料的載玻片從二甲本中取出放在紙上(切片的一面向上),迅速地在切片的中央滴一滴樹(shù)膠(千萬(wàn)不能待二甲本干燥后再進(jìn)行),用右手持小鑷子輕輕地夾住蓋玻片的右側(cè),稍為傾斜使其左側(cè)與封藏劑接角,然后再緩慢地將蓋玻片放下,這樣就可以減少或避免產(chǎn)生氣泡。如膠液不足,可以用玻棒再滴一滴樹(shù)膠從蓋玻片邊緣補(bǔ)足。如膠液過(guò)多,可在干燥以后用刀刮去,并用紗布蘸二甲本拭去殘留的樹(shù)膠。
染色結(jié)果:細(xì)胞核被蘇1木素染成藍(lán)色,細(xì)胞質(zhì)被伊紅染色呈粉紅色。
4)加底物顯色。5)另外,也可利用純化的抗原檢測(cè)標(biāo)本中的抗1體,例如抗-HBs等。固相上的酶催化底物成為有色產(chǎn)物。通過(guò)比色,測(cè)知標(biāo)本中抗原的量。在臨床檢驗(yàn)中,此法適用于檢驗(yàn)各種蛋白質(zhì)等大分子抗原,例如HBsAg、HBeAg、AFP、hCG等。只要獲得針對(duì)受檢抗原的異性抗1體,就可用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物而建立此法。如抗1體的來(lái)源為抗血1清,包被和酶標(biāo)用的抗1體1好分別取自不同種屬的動(dòng)物。如應(yīng)用單克1隆抗1體,一般選擇兩個(gè)針對(duì)抗原上不同決定簇的單抗,分別用于包被固相載體和制備酶結(jié)合物。這種雙位點(diǎn)夾心法具有很高的特異性,而且可以將受檢標(biāo)本和酶標(biāo)抗1體一起保溫反應(yīng),作一步檢測(cè)。