低溫生物菌種——保存方法介紹

脫水存法

①沙土保存法，能產(chǎn)孢子的細菌及霉菌可采用此法保存,即將沙和土以3:2比例混合，經(jīng)稀酸處理洗凈過篩,裝入小試管內(nèi),裝置高度為1cm;滅菌2～3次，烘干后即可將在斜面培養(yǎng)基上生長良好的孢子，用無菌蒸餾水2～2.5ml制成孢子懸液，吸取少許加入沙土管中，經(jīng)真空抽干，外觀呈松散狀態(tài),于4℃冰箱保存，保存期可達5～7年。

② 冷凍干燥法,將孢子懸浮液與保護劑（一般用脫脂牛奶）相混合，放在安瓿管內(nèi)于-20～-30℃的乙醇浴中速凍。然后，在低溫下用真空泵抽干，并用氧化磷或干冰使水汽結凍，熔封安瓿管，于低溫下保存。保存期可達5～10年之久。

③ 石蠟油封存法，在斜面菌種培養(yǎng)物上,倒上滅菌后的石蠟油，高出斜面1cm，于4℃冰箱或低溫干燥處保存，此法不適用于能利用石蠟油作碳源的微生物，保存期為一年以上。

低溫生物菌種——菌種分離方法

組織分離法

先將所需的藥用真菌采集回來，選取新鮮、個體大、壯實、中齡及無病蟲害的子實體（或菌核、菌索），作為分離用的材料。若為子實體，取其菌蓋或菌柄組織；若為菌核，取其全部或部分（如茯苓）菌核；若為菌索，取其部分根狀菌索（如蜜環(huán)菌）。再用75 %酒精進行表面消毒2 分鐘，用無菌水（或冷開水）沖洗數(shù)次，洗凈殘留的藥液后切成小塊。，然后，放入PDA 培養(yǎng)基的試管或培養(yǎng)皿上，置24 ～26℃溫度下，培養(yǎng)5 ～ 7 天。在分離的真菌組織周圍見長有白色菌絲時，應及時將菌絲移至斜面試管培養(yǎng)基上，再置溫度24 ～26 ℃下培養(yǎng)7～10 天，即得純菌種。所得的純菌種還可繼續(xù)擴大培養(yǎng)或保藏。

低溫生物菌種的使用溫度

普通硝化細菌在溫度低于15°C時，活性大幅度降低，硝化速度也明顯下降，溫度低于5°C時，普通硝化細菌的生命活動幾乎停止，處于休眠狀態(tài)，普通中溫微生物適合生長溫度為25~37℃，目前污水處理廠的處理工藝大都可實現(xiàn)15°C左右氨氮達標排放，當溫度低于12°C時，中溫菌的活性大大降低，甚至沒有繁殖功能，使得污水廠COD、氨氮和磷處理效果變差，出水無法達標排放，投加COD去除劑，氨氮去除劑，除磷劑等化學絮凝劑或氧化劑，在增加污水廠運營成本的同時，又形成了二次污染。