低溫生物知多少？

實(shí)驗(yàn)室的傳代保藏過(guò)程

1. 按說(shuō)明書要求復(fù)溶菌粉，轉(zhuǎn)種于適當(dāng)?shù)脑鼍囵B(yǎng)基內(nèi)（G1），復(fù)壯后轉(zhuǎn)接至平板上，并于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間，分離出單個(gè)純種菌落，此為第2代（G2）。

2. 鑒定完成后，挑取純菌落制成濃菌懸液用于制備甘油冷凍管，同時(shí)挑取純菌落轉(zhuǎn)接斜面作為工作用。此時(shí)，保藏為第2代，但工作用則為第三代。

3. 將第2代管冷凍保存，將工作用于適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后可用于試驗(yàn)。

4. 取一支冷凍保存的G2代轉(zhuǎn)種于平板和斜面培養(yǎng)基上，平板上的制成冷凍保藏管第三代（G3），斜面培養(yǎng)基經(jīng)適當(dāng)溫度下培養(yǎng)適當(dāng)時(shí)間后用作工作用（W3）。

5. 將第三代（G3）冷凍或低溫保存，將生長(zhǎng)、轉(zhuǎn)種后的G2經(jīng)滅菌處理后丟棄。

6. 當(dāng)工作用代數(shù)小于5時(shí)，可直接用上一代工作用轉(zhuǎn)接下一代工作用，如W3可直接轉(zhuǎn)接為W4。

7. 按上述程序操作，直至G4轉(zhuǎn)為W5為止，需重新開啟安瓿，再重復(fù)上述操作程序、保藏和使用。

以上方法中，被分為兩類。傳代用和工作用，傳代用用于甘油冷凍管法保藏，工作用用斜面低溫保藏法保藏。

實(shí)驗(yàn)證明，甘油冷凍管的有效期至少為2年，但其主要適用于細(xì)菌（需氧）、酵母菌的傳代、保藏、真菌和芽孢類細(xì)菌則需應(yīng)用其它方法。

低溫生物菌種的使用溫度

普通硝化細(xì)菌在溫度低于15°C時(shí)，活性大幅度降低，硝化速度也明顯下降，溫度低于5°C時(shí)，普通硝化細(xì)菌的生命活動(dòng)幾乎停止，處于休眠狀態(tài)，普通中溫微生物適合生長(zhǎng)溫度為25~37℃，目前污水處理廠的處理工藝大都可實(shí)現(xiàn)15°C左右氨氮達(dá)標(biāo)排放，當(dāng)溫度低于12°C時(shí)，中溫菌的活性大大降低，甚至沒(méi)有繁殖功能，使得污水廠COD、氨氮和磷處理效果變差，出水無(wú)法達(dá)標(biāo)排放，投加COD去除劑，氨氮去除劑，除磷劑等化學(xué)絮凝劑或氧化劑，在增加污水廠運(yùn)營(yíng)成本的同時(shí)，又形成了二次污染。

生物菌種發(fā)酵成有機(jī)肥如何操作的？

發(fā)酵肥料操作過(guò)程：

1、菌種一般用量為0.2%--0.5%。

2、原輔料及要求：主要物料：水果渣、干蔗渣、食用菌渣、酒糟、啤酒糟、糖渣、醋渣、淀粉渣、木薯渣、檸檬酸渣、醬油渣、味精渣、粉渣、豆腐渣、藥渣、油渣、油餅粕、糠麩、棉菜粕、霉變飼料、污泥、糖廠啤酒廠渣泥、屠宰下腳料、潲（泔）水、剩飯菜、人動(dòng)物糞便等大宗物料。

輔料：各種農(nóng)作物秸稈、樹葉雜草、瓜藤、稻草、松殼、花生殼、鋸木屑、谷殼粉、統(tǒng)糠等干燥、粉碎、高碳即可。

3、原輔料配比：主料∶輔料=5:1-3:1。

4、水分控制在60-65%，手抓物料成團(tuán)剛好出水。

5、按要求將菌種、主料和輔料全部混合均勻

6、環(huán)境溫度15℃以上，一次堆料不少于4方，堆成寬1.5～2米、高0.6米左右、長(zhǎng)度不限的堆，并用棍在堆內(nèi)打通氣孔。

7、堆溫升至50℃時(shí)開始翻倒，每天一次，如堆溫超過(guò)65℃，再加次翻倒。溫度控制在70℃以下，溫度太高對(duì)養(yǎng)分有影響。

8、腐熟標(biāo)志：堆溫降低，物料疏松，無(wú)物料原臭味，稍有氨味，堆內(nèi)產(chǎn)生白色菌絲。

9、腐熟的原肥：直接使用，生產(chǎn)商品有機(jī)肥、生物有機(jī)肥、有機(jī)無(wú)機(jī)復(fù)混肥、生物有機(jī)無(wú)機(jī)復(fù)混肥等。

注意：

①視水分多少增減配比，發(fā)酵混合物的總水分應(yīng)控制在60～65%。過(guò)高過(guò)低均不利于發(fā)酵，水過(guò)少，發(fā)酵慢；水過(guò)多會(huì)導(dǎo)致通氣差、升溫慢并產(chǎn)生臭味。水分合適與否判斷辦法：手緊抓一把物料，指縫見(jiàn)水印但不滴水，落地即散。

②如果按每噸添加1公斤尿素或10公斤過(guò)磷酸鈣發(fā)酵效果。

低溫生物菌種——常用菌種介紹

巨大芽孢菌

巨大芽孢菌(Bacillus megaterium de Bary，1884)：桿狀，末端圓，單個(gè)或呈短鏈排列。1.2-1.5×2.0-4.0微米，嚴(yán)格好氧，能運(yùn)動(dòng)，革蘭氏陽(yáng)性，芽孢1.0-1.2×1.5-2.0微米，橢圓形，中生或次端生 。芽孢從橢圓形到長(zhǎng)形不等；不能生成乙酰；菌株能運(yùn)動(dòng)，但運(yùn)動(dòng)緩慢，需要游離氧；發(fā)酵葡萄糖產(chǎn)酸；DNA的G C含量為36%-38%。 

接觸酶陽(yáng)性；水解淀粉和酪素；V-P反應(yīng)和卵黃反應(yīng)陰性。瓊脂平板微波狀，平隆，淺黃白色轉(zhuǎn)淺灰白色至淺灰褐色，表面略有光澤，在馬鈴薯塊上生長(zhǎng)，由淺黃灰色變?yōu)榛疑Ｒ夯髂z慢、胨化牛奶、水解淀粉。 

工業(yè)上用于生產(chǎn)葡萄糖異構(gòu)酶，巨大芽孢菌在回收貴重金屬方面有著重要作用，還能降解土壤中難溶的含磷化合物，使之成為作物能吸收的可溶物巨大芽孢菌與球形芽孢菌混合培養(yǎng)時(shí)具有固氮增效作用，非常適合制成微生物肥料。 

巨大芽孢菌作為一種重要解磷細(xì)菌被廣泛應(yīng)用于農(nóng)業(yè)生產(chǎn)中，將其優(yōu)化培養(yǎng)制成菌劑肥料使用，可以提高土壤肥質(zhì)，增產(chǎn)增收。近年來(lái)，隨著微生物肥料在農(nóng)業(yè)上的廣泛應(yīng)用，巨大芽孢菌以其在土壤中的解磷作用而被深入研究，是工業(yè)上生產(chǎn)解磷固鉀肥的常用菌種，同時(shí)在水體處理和提高煙葉發(fā)酵增香效果上有特別的作用。 

巨大芽孢菌能降解有機(jī)磷藥和曲霉。張廣志等人從長(zhǎng)期受有機(jī)磷藥污染的土壤中分離出3株能降解胺磷和芽孢菌，其中2株為巨大芽孢菌。孫豐芹發(fā)現(xiàn)巨大芽孢菌TRS-3對(duì)曲霉AFB1有去除作用，其發(fā)酵上清液降解AFB1的能力達(dá)到78.55%。